病理性瘢痕中粘著斑激酶、磷酸化蛋白激酶B和核因子κB的表達(dá).pdf

1、病理性瘢痕(pathologic scar,PS)是真皮損傷后組織異常修復(fù)的結(jié)果。它發(fā)生在創(chuàng)傷、感染、燒傷后，以成纖維細(xì)胞(fibroblast，F(xiàn)Bs)的過(guò)度增生和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的過(guò)度沉積為特征。臨床表現(xiàn)為疼痛、騷癢、瘤樣增生并伴有不同程度的功能障礙。病理性瘢痕的病因和發(fā)病機(jī)制尚未明了，目前尚無(wú)行之有效的治療方法。 近年來(lái)，隨著現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)在瘢痕領(lǐng)域的深入研究，從而

2、進(jìn)一步認(rèn)識(shí)了病理性瘢痕的生物學(xué)基礎(chǔ)：即修復(fù)細(xì)胞(主要是FBs)的大量增殖與凋亡抑制、ECM中膠原合成與降解失衡、部分細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生及其三者之間的密切關(guān)系。病理性瘢痕FBs的生物學(xué)行為是探索其發(fā)病機(jī)制的重點(diǎn)，信號(hào)傳導(dǎo)通路激活使FBs大量增殖在纖維化疾病中的意義已引起關(guān)注。 粘著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)是一種非受體型的酪氨酸蛋白激酶，主要參與整合素介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)。整合素激活FAK后進(jìn)入磷脂酰肌

3、醇-3-激酶(phosphatedylinositol-3 kinase，P13K/AKT)途徑。蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)作為P13K途徑直接的靶蛋白，在該信號(hào)系統(tǒng)中起著關(guān)鍵作用，磷酸化蛋白激酶B(phosphor-protein kinase B，P-PKB)為其活化形式，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、對(duì)抗細(xì)胞調(diào)亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期等多種生物學(xué)功能。核因子KB(nuclear factor KB，NF-KB)是一種具有多

4、向性調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)細(xì)胞內(nèi)許多基因的表達(dá)起著關(guān)鍵性的調(diào)控作用。為PKB的下游信號(hào)蛋白，在外來(lái)信號(hào)刺激下，抑制性蛋白IKB降解，NF-KB從其復(fù)合物中解離，才能進(jìn)入細(xì)胞核，與胞核內(nèi)特定的DNA序列，發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。已有研究表明，病理性瘢痕的發(fā)生發(fā)展與FBs表面整合素的過(guò)度表達(dá)密切相關(guān)。P13K是整合素介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑之一，整合素介導(dǎo)的P13K途徑在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用已被證實(shí)。在腫瘤基質(zhì)和病理性瘢痕中都伴有整合素的過(guò)度表達(dá)。研

5、究P13K途徑在病理性瘢痕中的表達(dá)與病理性瘢痕發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，將有助于揭示病理性瘢痕發(fā)生的機(jī)制，為預(yù)防和臨床治療提供依據(jù)。 本課題利用免疫組化染色技術(shù)，探討FAK、P-PKB和NF-κB在病理性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮膚中的表達(dá)情況及其相互關(guān)系，旨在揭示P13K途徑與病理性瘢痕形成的關(guān)系，以便為預(yù)防和治療病理性瘢痕提供新的思路。 材料與方法 選用整形外科手術(shù)切除的病理性瘢痕、非病理性瘢痕，取材部位為面、頸、胸或

6、四肢等。正常皮膚取自皮膚移植供皮區(qū)的全厚皮膚，取材部位為四肢、腹部或背部等。所有標(biāo)本均有詳細(xì)的完整病歷和隨訪記錄、均未行放療、激光或免疫等治療并經(jīng)病理證實(shí)。瘢痕疙瘩10例，增生性瘢痕30例為病理性瘢痕組，其中男22例，女18例，年齡2～65(20.8±9.1)歲，病程0.6～6.0(2.3±1.4)年；非病理性瘢痕20例，男10例，女10例，年齡3～50(21.5±11.3)歲，病程0.5～5.0(2.3±1.6)年；正常皮膚20例，男

7、12例，女8例，年齡2～64(23.5±11.6)歲。本課題采用免疫組化染色技術(shù)(SP法)，分別檢測(cè)P13K途徑中的FAK、p-PKB和NFKB在病理性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮膚中的表達(dá)情況，并探討在病理性瘢痕中FAK、p-PKB和NF-κB表達(dá)的相互關(guān)系。所測(cè)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1.FAK蛋白免疫組化結(jié)果病理性瘢痕中膠原結(jié)節(jié)、漩渦狀結(jié)構(gòu)中的大部分FBs胞漿陽(yáng)性著

8、色，陽(yáng)性表達(dá)率為65.00％(26/40)。非病理性瘢痕組織中部分FBs胞漿陽(yáng)性，著色較淡，陽(yáng)性表達(dá)率為35.00％(7/20)。正常皮膚組織中FBs中FAK蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為25.00％(5/20)。病理性瘢痕與非病理性瘢痕、正常皮膚比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。非病理性瘢痕與正常皮膚比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 2.p-PKB蛋白免疫組化結(jié)果病理性瘢痕中p-PKB主要表達(dá)于FBs胞漿，陽(yáng)性信號(hào)主要集中在膠原結(jié)

9、節(jié)、漩渦狀結(jié)構(gòu)中，陽(yáng)性表達(dá)率67.50％(27/40)。部分血管內(nèi)皮細(xì)胞和皮膚基底層細(xì)胞胞漿亦呈陽(yáng)性。在非病理性瘢痕的FBs胞漿中部分表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率40.00％(8/20)。正常皮膚中則大多缺乏表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率20.00％(4/20)。病理性瘢痕與非病理性瘢痕、正常皮膚比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。非病理性瘢痕與正常皮膚比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3.NF-κB蛋白免疫組化結(jié)果NF-κB在細(xì)胞胞漿或/和胞核

10、著色均呈棕黃色為陽(yáng)性標(biāo)志。病理性瘢痕膠原結(jié)節(jié)、漩渦狀結(jié)構(gòu)中的大部分FBs胞核或/和胞漿陽(yáng)性著色，陽(yáng)性表達(dá)率為72.50％(23/40)。大部分血管內(nèi)皮細(xì)胞和基底層細(xì)胞亦呈陽(yáng)性。非病理性瘢痕組織中部分FBs胞漿或/和胞核陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為40.00％(8/20)。正常皮膚組織中NFrJ3蛋白主要分布于少部分FBs、表皮基底層細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿或/和胞核中，F(xiàn)Bs陽(yáng)性表達(dá)率為35.00％(7/20)。病理性瘢痕與非病理性瘢痕、正常皮

11、膚比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。非病理性瘢痕與正常皮膚比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.FAK的表達(dá)與p-PKB、NF-κB表達(dá)關(guān)聯(lián)性分析病理性瘢痕組中，F(xiàn)AK表達(dá)與p-PKB蛋白表達(dá)、FAK蛋白表達(dá)與NFRB蛋白表達(dá)、FAK表達(dá)與NF-κB蛋白表達(dá)均有正相關(guān)性(P<0.05)。 結(jié)論 1.FAK在病理性瘢痕中FBs胞漿中呈高表達(dá)，提示一些細(xì)胞因子(TGF，PDGF等)可能通過(guò)刺激FBs表面整合

12、素的表達(dá)并使局部FAK酪氨酸磷酸化而激活，F(xiàn)AK進(jìn)一步激活下游信號(hào)傳導(dǎo)(Ras/MAPK途徑，P13K途徑)，促進(jìn)FBs的異常增殖，參與病理性瘢痕的形成。 2.p.PKB在病理性瘢痕中表達(dá)上調(diào)，可能通過(guò)激活各種因子參與了FBs的分化、增殖或?qū)?xì)胞因子的調(diào)控，抑制其凋亡，促進(jìn)病理性瘢痕形成。 3.NF-κB在病理性瘢痕中高表達(dá)，可能通過(guò)促進(jìn)bcl-2、C-myc、Cyclin D1基因表達(dá)、促進(jìn)抑制死亡受體(DR)凋亡途徑