抗腫瘤藥物及免疫抑制劑增強(qiáng)乙型肝炎病毒復(fù)制的研究.pdf

1、背景:在接受免疫抑制劑或者化療藥物治療的乙型肝炎病毒(hepatitisB virus，HBV)感染患者中，HBV復(fù)制再活化是其共同的現(xiàn)象。HBV復(fù)制再活化的特征性標(biāo)志是非活動(dòng)性或已治愈的HBV感染患者血清中HBVDNA再度出現(xiàn)或升高，常常伴隨肝臟炎癥活動(dòng)，這種現(xiàn)象可自發(fā)形成，但多數(shù)是由于應(yīng)用化療藥物、免疫抑制劑或者免疫功能低下所引起，可導(dǎo)致急性肝炎，甚至發(fā)展成急性肝衰竭或者死亡。然而，大多數(shù)病例臨床癥狀并不明顯，或者直至發(fā)展為活動(dòng)性肝

2、炎時(shí)才被發(fā)現(xiàn)，這也常常導(dǎo)致接受化療或者免疫抑制劑治療的患者療程中斷，對(duì)患者預(yù)后非常不利。臨床觀察也建議，在有HBV復(fù)制再活化風(fēng)險(xiǎn)的情況下，使用抗病毒藥物能夠明顯預(yù)防HBV復(fù)制再活化的發(fā)生。
　　HBV復(fù)制再活化起始于HBV復(fù)制的增強(qiáng)，并很快出現(xiàn)在應(yīng)用免疫抑制劑或抗腫瘤藥物之后，這一現(xiàn)象的機(jī)制目前并不十分清楚。先前的研究已經(jīng)證實(shí)糖皮質(zhì)激素，如地塞米松，可體外誘導(dǎo)HBV復(fù)制以及表達(dá)增強(qiáng)，我們推測(cè)，其他免疫抑制劑和抗腫瘤藥物除了其全身性

3、免疫抑制作用，是否也能夠直接刺激HBV，誘導(dǎo)HBV復(fù)制及表達(dá)增強(qiáng)。
　　目的:體外實(shí)驗(yàn)，觀察抗腫瘤藥物以及免疫抑制劑是否直接誘導(dǎo)增強(qiáng)HBV復(fù)制和表達(dá)。
　　方法:
　　1以地塞米松作為陽(yáng)性對(duì)照，用HepG2.2.15細(xì)胞系作為HBV體外復(fù)制模型，以去除機(jī)體免疫因素的影響，用Native Western blot和NativeSouthern blot方法，檢測(cè)細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物，如表柔比星、絲裂霉素、氟尿嘧啶，以及免疫

4、抑制劑，如來(lái)氟米特、霉酚酸、地塞米松，對(duì)HBV復(fù)制以及表達(dá)的影響。
　　2用攜帶熒光素酶報(bào)告基因的復(fù)制型HBV載體pCH-rep-secNLuc穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，構(gòu)建熒光定量示蹤HBV復(fù)制細(xì)胞模型HepG2HBV-secNluc，此細(xì)胞系能夠穩(wěn)定分泌攜帶熒光素酶報(bào)告基因的HBV病毒顆粒。以細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物，如表柔比星、絲裂霉素、氟尿嘧啶，以及免疫抑制劑，如來(lái)氟米特、霉酚酸、地塞米松，誘導(dǎo)此細(xì)胞，用熒光素酶測(cè)定儀檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)

5、液中分泌型熒光素酶表達(dá)水平的變化，并用NativeWestern blot方法檢測(cè)細(xì)胞裂解液中HBV核心蛋白的表達(dá)。
　　3用Native Southern blot方法，觀察細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物，如表柔比星、絲裂霉素、氟尿嘧啶，以及免疫抑制劑，如來(lái)氟米特、霉酚酸、地塞米松，誘導(dǎo)HBV復(fù)制增強(qiáng)之后，是否還對(duì)拉米夫定敏感。
　　結(jié)果:
　　1隨著細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物，如表柔比星、絲裂霉素、氟尿嘧啶，以及免疫抑制劑，如來(lái)氟米特

6、、霉酚酸、地塞米松，濃度的增加，HBV復(fù)制及表達(dá)逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明這些藥物能夠體外直接刺激HBV，誘導(dǎo)HBV復(fù)制及表達(dá)增強(qiáng)。
　　2表柔比星、絲裂霉素、氟尿嘧啶、A771726、霉酚酸、地塞米松可以增強(qiáng)熒光定量示蹤HBV復(fù)制細(xì)胞模型HepG2 HBV-secNluc細(xì)胞系HBV核心蛋白以及熒光素酶的表達(dá)。熒光定量示蹤HBV復(fù)制細(xì)胞模型HepG2HBV-secNluc細(xì)胞系經(jīng)表柔比星誘導(dǎo)16h之后，熒光素酶的表達(dá)水平可從（3.42±0.

7、06）×106增加至（8.38±0.56）×107，經(jīng)絲裂霉素誘導(dǎo)16h之后，熒光素酶的表達(dá)水平可從（3.45±0.21）×106增加至（3.83±0.45）×107，經(jīng)氟尿嘧啶誘導(dǎo)16h之后，熒光素酶的表達(dá)水平可從（3.51±0.17）×106增加至（4.49±0.29）×107，經(jīng)A771726誘導(dǎo)2天之后，熒光素酶的表達(dá)水平可從（3.60±0.33）×106增加至（1.37±0.13）×107，經(jīng)霉酚酸誘導(dǎo)2天之后，熒光素酶的表達(dá)

8、水平可從（3.65±0.27）×106增加至（1.31±0.05）×107，經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)2天之后，熒光素酶的表達(dá)水平可從（3.67±0.27）×106增加至（6.64±0.42）×106，統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)顯示，每種藥物各濃度組之間比較P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=3)。
　　3拉米夫定能夠抑制表柔比星、絲裂霉素、氟尿嘧啶、A771726、霉酚酸、地塞米松對(duì)HBV復(fù)制的的增強(qiáng)作用。
　　結(jié)論:免疫抑制劑和抗腫瘤藥物除了其全身