Hep G2、Bel-7402細胞裸鼠皮下移植性肝癌模型的實驗研究.pdf

1、肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，其中肝細胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是肝癌中最常見的類型，占到病例總數(shù)的70％~80%。為了深入研究肝癌的發(fā)病機理，探索新的治療方法，建立科學的肝癌動物模型是實驗的關鍵。
　　本課題擬通過比較HepG2、Bel-7402兩種人肝癌細胞在不同條件下行裸鼠皮下移植時成瘤率的不同，以及兩種細胞成瘤后腫瘤形態(tài)、腫瘤體積變化規(guī)律及AFP表達方面的差異，從中選擇一種合適的腫瘤

2、細胞，并探索其最佳的成瘤條件，為進一步實驗提供數(shù)據(jù)。
　　目的：
　　1．比較HepG2、Bel-7402兩種人肝癌細胞在不同條件下行裸鼠皮下移植時成瘤率與成瘤潛伏期的差別。
　　2．比較HepG2、Bel-7402兩種細胞荷瘤鼠皮下腫瘤生長速度的差別，并歸納其腫瘤增長規(guī)律。
　　3.比較HepG2、Bel-7402兩種細胞荷瘤鼠腫瘤大體形態(tài)學差異，檢測血清AFP濃度并做腫瘤組織的病理、免疫組化分析。
　　

3、方法：
　　1．將90只BALB/c裸鼠按照腫瘤細胞懸液的濃度及鼠齡隨機平均分成9組，其中8組分別皮下注射HepG2細胞和Bel-7402細胞，第9組為對照組。比較HepG2、Bel-7402這兩種人肝癌細胞在不同條件下成瘤率與成瘤潛伏期的差別。
　　2．HepG2、Bel-7402兩種細胞裸鼠皮下成瘤后每周用游標卡尺測量瘤體大小。腫瘤體積的計算公式V=πab2/6（V：體積，a：腫瘤長徑，b：腫瘤短徑）。
　　3．裸

4、鼠成瘤后，利用化學發(fā)光法檢測裸鼠血清AFP濃度，觀察HepG2、Bel-7402兩種細胞形成的裸鼠皮下腫瘤大體形態(tài)的差異，將切下的腫瘤組織行免疫組化法檢測AFP及HepPar1表達。
　　結果：
　　1.當HepG2細胞懸液濃度達到5.0×107/ml，4~8周齡和8~12周齡的裸鼠均能得到很高的成瘤率（均為100%）。而對于Bel-7402細胞，細胞懸液濃度必須達到5.0×107/ml，且僅在4~8周齡的裸鼠皮下注射才能得

5、到較高的成瘤率（80%）。
　　2.HepG2、Bel-7402兩種細胞在同等條件下裸鼠個體間的出瘤時間并不恒定，HepG2細胞平均成瘤時間為19.4±5.2天；而Bel-7402細胞平均成瘤時間為34.3±15.7天。
　　3.HepG2細胞裸鼠皮下腫瘤的典型表現(xiàn)為多發(fā)的節(jié)結樣突起，腫瘤組織內(nèi)部由多個白色的節(jié)結樣團塊組成。Bel-7402細胞皮下腫瘤的表面則為較平滑，腫瘤組織內(nèi)部周邊較韌，瘤體中心則主要是豆腐渣樣壞死組織。

6、
　　4.兩種細胞荷瘤鼠成瘤后第4周查血清AFP均陰性。免疫組化檢測HepG2細胞腫瘤HepPar1表達呈陽性、Bel-7402細胞腫瘤HepPar1表達呈陰性；而兩種細胞AFP表達均為陰性。
　　結論：
　　1．建立裸鼠肝癌動物模型時，HepG2細胞較Bel-7402細胞更易裸鼠皮下成瘤。
　　2．HepG2細胞較Bel-7402細胞成瘤潛伏期更短，并且成瘤后腫瘤增長速度更快。
　　3．HepG2細胞、B