H19-IGF2印記簇在骨骼肌發(fā)育中的調(diào)控機(jī)理初步研究.pdf

1、豬肉是我國居民重要的動物蛋白來源，隨著國民生活水平的不斷提高，人們對豬肉品質(zhì)、產(chǎn)量的要求也越來越高。因此從改善肌肉發(fā)育等性狀的角度來提高豬肉的品質(zhì)和產(chǎn)量成為了豬遺傳改良的重點(diǎn)。
　　目前很多報道都已證實印記基因在骨骼肌的發(fā)育過程中發(fā)揮了不可替代的作用，其中就有H19-IGF2印記基因簇。已有的研究表明H19、IGF2呈反向表達(dá)模式，且H19內(nèi)部生成的miR-675能抑制C2C12細(xì)胞增殖，siH19和過表達(dá)let7都能促進(jìn)C2C1

2、2細(xì)胞分化，但目前H19/IGF2印記基因簇調(diào)控骨骼肌發(fā)育的機(jī)理還不是很清楚，在豬中未見報道。本研究較系統(tǒng)地揭示了H19、IGF2、miR-675印記簇基因及H19互作的let7家族基因在大白豬、梅山豬骨骼肌組織及成肌細(xì)胞C2C12分化過程中的表達(dá)規(guī)律，并對C2C12成肌分化過程中H19啟動子甲基化水平、轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律進(jìn)行了研究。主要取得以下結(jié)果:
　　(1)通過定量的方法證實H19、IGF2在梅山、大白豬骨骼肌發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律是一

3、致的，H19、IGF2在胚胎50d骨骼肌中的表達(dá)水平比95d略低，但胚胎期表達(dá)水平都極顯著高于成年期。品種間比較發(fā)現(xiàn)，梅山豬胚胎50d和95d骨骼肌中H19、IGF2表達(dá)顯著高于大白豬，但是在成年期大白豬骨骼肌H19、IGF2表達(dá)顯著高于梅山豬。
　　(2)在梅山豬骨骼肌發(fā)育的過程中l(wèi)et7-a呈逐漸上調(diào)表達(dá)趨勢，let7-f、let7-g先上升后下降;大白豬中l(wèi)et7-a、let7-f、let7-g均呈逐漸上調(diào)表達(dá)趨勢，從胚胎期

4、到成年期，H19顯著下降，let7-a、let7-f、let7-g顯著上調(diào)。品種間比較發(fā)現(xiàn)let7-a在3個時期的表達(dá)量都顯著高于梅山豬，而let7-f、let7-g在胚胎50d、胚胎95d的大白豬肌肉中的表達(dá)量都顯著低于梅山豬，在成年期的大白豬肌肉中的表達(dá)量都顯著高于梅山豬。
　　(3)Let-7基因表達(dá)水平與肉質(zhì)性狀pH值相關(guān)。在pHu（宰后24h測的pH）高的個體中，let7-a、let7-f、let7-g均高于pHu低的個

5、體。且在pHu高的個體中H19的表達(dá)低于pHu低的個體。在pH1(宰后45min測的pH)高的個體中，let7-a、let7-f、let7-g的表達(dá)量均顯著下降了。
　　(4)H19、miR-675-3p在小鼠組織表達(dá)譜中的分析表明，他們在肌肉中的表達(dá)量最高。且H19/IGF2基因簇相關(guān)基因H19、IGF2、INS2在C2C12分化過程中都是先上調(diào)后下降的，NCTC1一直上調(diào)。
　　(5)雙熒光素酶報告基因分析結(jié)果表明，在C

6、2C12細(xì)胞中H19上游0-4K是沒有啟動活性的。
　　(6)對C2C12細(xì)胞成肌分化過程中，H19基因4kb啟動子區(qū)進(jìn)行甲基化分析發(fā)現(xiàn)分化0d和分化4d共有34個差異甲基化位點(diǎn)，主要集中在H19的第四個CTCF結(jié)合位點(diǎn)附近，分化4天該結(jié)合位點(diǎn)整體甲基化程度顯著高于分化0d的。在分化0d、1d、2d、4d的C2C12細(xì)胞中，在2d時第四個CTCF結(jié)合位點(diǎn)整體甲基化程度最低，在0d、1d、4d時的甲基化水平依次升高，1d、2d、4d