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1、本文對(duì)牛羊腐蹄病壞死梭桿菌白細(xì)胞毒素重組亞單位疫苗進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容如下: 1.采用PCR方法設(shè)計(jì)五段彼此相互重疊、覆蓋全長(zhǎng)F. necrophorum白細(xì)胞毒素基因(lktA)的引物,從F. necrophorum A25菌株(羊源)和H05(牛源)菌株中分別擴(kuò)增了lktA基因(lktA1、lktA2、lktA3、lktA4和lktA5),測(cè)序、拼接后與GenBank發(fā)表的F. necrophorum A25菌株白細(xì)胞毒素基
2、因核甘酸序列進(jìn)行比對(duì)分析。 2.利用pET-28a、pET-30a、pET-32a、pQE30、pPRO-EX-HTa和pGEX-6p-1原核表達(dá)載體構(gòu)建了一系列表達(dá)5個(gè)截短F. necrophorum lktA基因的重組質(zhì)粒,陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E. coli BL21(DE3)或E. coli Rosetta<'TM>(plyss)后,用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。 3.將PL1重組蛋白(疫苗Ⅰ)、PL2重組蛋白(疫苗Ⅱ)、lkt
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