CpG ODN作為結(jié)核分枝桿菌亞單位疫苗佐劑的研究.pdf

1、目的:CpGODN是近年出現(xiàn)的具有較強(qiáng)免疫刺激能力的新型佐劑。本課題擬以CpG1826和CpG7909作為佐劑,探討CpG1826和CpG7909能否增強(qiáng)結(jié)核分枝桿菌ESAT6-Ag85A重組亞單位疫苗(Pe685a)的免疫效應(yīng)和抗結(jié)核保護(hù)效果。
　　方法:將CpG1826、CpG7909分別與Pe685a混合均勻后經(jīng)腹腔途徑免疫相應(yīng)組小鼠,并設(shè)置PBS、CpG1826和CpG7909陰性對(duì)照組,弗氏不完全佐劑混合Pe685a為陽(yáng)

2、性對(duì)照組。初次免疫后每間隔兩周加強(qiáng)免疫兩次。末次免疫2周后小鼠處死用于免疫分析:采用ELISA法檢測(cè)血清中特異性IgG抗體和相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2的表達(dá);MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞特異性增殖;FACS檢測(cè)脾CD3+CD4+與CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞分型;RT-PCR檢測(cè)脾臟相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-6和TLR9的轉(zhuǎn)錄。末次免疫后第4周用M.tb/H37Rv毒株經(jīng)尾靜脈攻擊免疫小鼠,4周后采用肺組織病理?yè)p傷評(píng)分評(píng)價(jià)

3、各佐劑與Pe685a混合免疫對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染小鼠的保護(hù)效果。
　　結(jié)果:與PBS組相比,CpG7909、弗氏不完全佐劑與亞單位疫苗Pe685a分別免疫小鼠后,均能誘發(fā)小鼠產(chǎn)生明顯的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng),而CpG1826則不能。同時(shí),和弗氏不完全佐劑相比,CpG7909與亞單位疫苗Pe685a免疫小鼠,能刺激小鼠產(chǎn)生更高水平的特異性IgG抗體滴度,促進(jìn)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2的分泌(P<0.05),增強(qiáng)脾淋巴細(xì)胞增殖(P<0

4、.05),誘導(dǎo)脾臟CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞分化和增殖(P<0.05),促進(jìn)脾臟中IFN-γ、TNF-α、IL-6和TLR9的轉(zhuǎn)錄(P<0.05)。然而,M.tb/H37Rv毒株攻擊免疫小鼠后,和弗氏不完全佐劑相比,CpG7909與亞單位疫苗Pe685a免疫的小鼠肺組織病理?yè)p傷的未見(jiàn)明顯減輕。
　　結(jié)論:兩種CpGODN中只有CpG7909能特異性增強(qiáng)Pe685a融合蛋白誘導(dǎo)的體液免疫和細(xì)胞免疫,但CpG7909