豬鏈球菌2型重組亞單位疫苗的研制.pdf

1、豬鏈球菌2型（Streptococcus suis serotype2， SS2）是一種人獸共患的傳染病病原，不僅可引起豬腦膜炎、關節(jié)炎、心內膜炎、敗血癥、肺炎和突然死亡，還可感染相關人員并致死，在我國和其他養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達的國家已多次流行，對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失.
　　 豬鏈球菌2型能產生多種毒力因子，如溶血素、溶菌酶釋放蛋白、胞外因子等.溶血素能刺激機體產生免疫保護作用，且各型豬鏈球菌均能產生生化和免疫特性相似的溶血素。因此

2、，溶血素能對各型鏈球菌感染產生交叉保護作用.對我國江蘇及其周邊地區(qū)的流行病學調查顯示，來自疫區(qū)的SS2均為對豬油強毒力的MRP+E F+表現(xiàn)型，由此可見MRP與EF在致病過程中的重要作用，本實驗對具有免疫原性的MRP-EF與SLY蛋白進行表達，以期制造出可以對豬鏈球菌2型進行有效預防的基因工程疫苗.
　　 將已經構建好的重組質粒pET32a-MRP-EF與pET32a-SLY轉入大腸桿菌BL21中，優(yōu)化誘導時間、IPTG濃度、溫

3、度等誘導條件大量表達出分子量分別約為74kD和36kD的融合蛋白，并利用親和層析的方法純化兩種蛋白，兩種蛋白免疫轉印均可被SS2的抗血清識別，具有免疫原性.
　　 將純化好的豬鏈球菌2型MRP-EF與SLY重組蛋白作為抗原包被ELISA板建立檢測兩種免疫原產生抗體的ELISA方法。試驗的最佳反應條件為：抗原包被濃度分別為1.25μg/mL和0.78μg/mL，血清1:200稀釋；一抗反應時間為90min，二抗反應時間分別為60m

4、in和45min，具有較高的穩(wěn)定性、特異性和敏感性.
　　 通過基因工程技術分別表達了豬鏈球菌2型MRP-EF與SLY兩種重組蛋白，分別或1∶1混合，與不同佐劑混合乳化，設立免疫劑量梯度，免疫BALB/C小鼠，并以鏈球菌2型全菌滅活苗作對照，二免后用SS2-1活菌攻擊，并采集各組血清，間接ELISA測定效價.結果顯示，試驗組保護效果優(yōu)于對照組；MRP-EF+SLY免疫組的保護效果優(yōu)于其他試驗組和對照組，其中25μg蛋白組合免疫的

5、小鼠保護力等同于50μg蛋白組合.試驗證實兩種蛋白各25μg時為最佳免疫劑量.ISA佐劑效果最佳.
　　 取表達豬鏈球菌2型MRP-EF與SLY的兩種重組菌的表達產物rMRP-EF及rSLY，分別或1:1混合，與ISA206佐劑混合乳化，免疫仔豬，并以豬鏈球菌2型全菌滅活苗作對照.二免后用SS2-1活菌攻擊，并采集rMRP-EF/rSLY組及全菌滅活疫苗組仔豬的血清，間接ELISA測定效價.結果顯示，rMRP-EF/rSLY組r