大鼠腦組織勻漿液對骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞方向誘導分化的影響.pdf

1、目的：
　　探討體外分離培養(yǎng)BMSCs的條件,并觀察新生大鼠腦組織勻漿液對BMSCs誘導分化的影響。
　　方法：
　　1.選用健康SD大鼠,用貼壁培養(yǎng)法分離純化BMSCs,顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)和生長特性,采用流式細胞學技術(shù)檢測BMSCs細胞表面抗原分子,通過免疫表型鑒定BMSCs。
　　2.取第3代BMSCs,采用貼壁培養(yǎng)法誘導向神經(jīng)方向分化,實驗分為空白對照組和新生大鼠腦組織勻漿液誘導組,對照組用L-DMEM

2、培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),誘導組用新生大鼠的腦組織勻漿液培養(yǎng),連續(xù)培養(yǎng)7d。
　　3.誘導后采用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化,采用RT-PCR技術(shù)檢測神經(jīng)細胞表面標志物的表達。
　　結(jié)果：
　　1.利用貼壁法傳代培養(yǎng)的BMSCs,細胞形態(tài)比較均一,細胞形態(tài)呈成纖維樣或紡錘樣,成漩渦狀或簇狀生長;流式細胞學檢測結(jié)果顯示BMSCs穩(wěn)定表達表面分子CD90(95.3％),CD29(99.9%),幾乎不表達造血系統(tǒng)表面分子CD45(0.

3、1%),CD11(3.8%),CD90和CD29的雙陽性共表達率可達97.6%,CD45和CD11b的雙陽性共表達率為0.1%。
　　2.誘導后的BMSCs倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)呈現(xiàn)神經(jīng)細胞樣改變,RT-PCR檢測結(jié)果顯示新生大鼠腦組織勻漿誘導組BMSCs表達神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)。
　　結(jié)論：
　　1.采用全骨髓貼壁培養(yǎng)方法,可以獲得