大鼠腦組織勻漿液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化的影響.pdf

1、目的：
　　探討體外分離培養(yǎng)BMSCs的條件,并觀察新生大鼠腦組織勻漿液對(duì)BMSCs誘導(dǎo)分化的影響。
　　方法：
　　1.選用健康SD大鼠,用貼壁培養(yǎng)法分離純化BMSCs,顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)特性,采用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)BMSCs細(xì)胞表面抗原分子,通過(guò)免疫表型鑒定BMSCs。
　　2.取第3代BMSCs,采用貼壁培養(yǎng)法誘導(dǎo)向神經(jīng)方向分化,實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組和新生大鼠腦組織勻漿液誘導(dǎo)組,對(duì)照組用L-DMEM

2、培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),誘導(dǎo)組用新生大鼠的腦組織勻漿液培養(yǎng),連續(xù)培養(yǎng)7d。
　　3.誘導(dǎo)后采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.利用貼壁法傳代培養(yǎng)的BMSCs,細(xì)胞形態(tài)比較均一,細(xì)胞形態(tài)呈成纖維樣或紡錘樣,成漩渦狀或簇狀生長(zhǎng);流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示BMSCs穩(wěn)定表達(dá)表面分子CD90(95.3％),CD29(99.9%),幾乎不表達(dá)造血系統(tǒng)表面分子CD45(0.

3、1%),CD11(3.8%),CD90和CD29的雙陽(yáng)性共表達(dá)率可達(dá)97.6%,CD45和CD11b的雙陽(yáng)性共表達(dá)率為0.1%。
　　2.誘導(dǎo)后的BMSCs倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞樣改變,RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示新生大鼠腦組織勻漿誘導(dǎo)組BMSCs表達(dá)神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)。
　　結(jié)論：
　　1.采用全骨髓貼壁培養(yǎng)方法,可以獲得