大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)向神經(jīng)細(xì)胞分化及神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)神經(jīng)元樣細(xì)胞的影響.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)向神經(jīng)細(xì)胞分化及神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)神經(jīng)元樣細(xì)胞的影響姓名：秦潔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：許予明閆福嶺20040520鄭州大學(xué)201)4屆碩士研究生學(xué)位論文大鼠骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)向神經(jīng)細(xì)胞分化及神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)神經(jīng)元樣塋I|I胞的影響的神經(jīng)元樣細(xì)胞的保護(hù)作用。為MSCs在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的研究和應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。材料與方法：取成年健康SD大鼠股骨和脛骨骨髓，密度梯度離心法分離獲取骨髓

2、單個(gè)核細(xì)胞(mononuclearcells，MNCs)。多次洗滌后，將細(xì)胞沉淀接種于含10％胎牛血清(FBS)的低糖DMEM(LDMEM)培養(yǎng)液中，置于37。C、5％C02、飽和濕度的C02孵箱中培養(yǎng)，細(xì)胞融合后用O25％胰酶消化傳代。培養(yǎng)36代的細(xì)胞接種于塑料培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞鋪滿80％培養(yǎng)皿時(shí)，采用堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgrowthfactorbFGF)培養(yǎng)24h，以促進(jìn)細(xì)胞的增殖。然后實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞應(yīng)用二甲

3、亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)和丁羥茴醚(butylatedhydroxyanisole，BHA)對(duì)大鼠MSCs(rMSCs)進(jìn)行體外定向誘導(dǎo)分化；對(duì)照組細(xì)胞(未誘導(dǎo)細(xì)胞)不加任何誘導(dǎo)劑。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)誘導(dǎo)1h、3h后神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物一巢蛋白(nestin)的表達(dá)，以及誘導(dǎo)5h后神經(jīng)元標(biāo)記物一神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronspecificenolase，NSE)和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物一膠質(zhì)細(xì)胞纖維酸性蛋

4、白(glailfibfillaryacidicprotein，GFAP)的表達(dá)，分別計(jì)數(shù)各種分化細(xì)胞的陽性率。誘導(dǎo)5h后，分別用含三種不同濃度GMl的DMEM培養(yǎng)液對(duì)分化的細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)，另設(shè)DMEM組、血清組和誘導(dǎo)液組，分別用不含血清的DMEM培養(yǎng)基、含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液和含抗氧化劑的誘導(dǎo)液繼續(xù)培養(yǎng)，24h、48h后分別用免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行NSE鑒定。結(jié)果：1分離后的大鼠骨髓MSCs(rMSCs)在體外培養(yǎng)條件下

5、，呈增殖性生長(zhǎng)。傳代后的rMSCs約7d左右可擴(kuò)增一倍。2rMSCs經(jīng)誘導(dǎo)1h后，即有部分細(xì)胞呈現(xiàn)神經(jīng)元樣形態(tài)，誘導(dǎo)5h結(jié)束時(shí)，大部分細(xì)胞具有典型神經(jīng)元樣形態(tài)：較多的神經(jīng)元樣細(xì)胞聚集在一起，相鄰細(xì)胞間的軸突聯(lián)結(jié)成網(wǎng)狀。3對(duì)照組rMSCs(未誘導(dǎo)rMSCs)僅表達(dá)少量nestin和NSE，陽性率分別為18％O8％和56％29％。實(shí)驗(yàn)組rMSCs誘導(dǎo)1h、3h后nestin陽性率分別為4020／033％和27O％29％，nestin的表達(dá)呈