大鼠骨髓間充質干細胞體外誘導向神經細胞分化及神經節(jié)苷脂對神經元樣細胞的影響.pdf

1、鄭州大學碩士學位論文大鼠骨髓間充質干細胞體外誘導向神經細胞分化及神經節(jié)苷脂對神經元樣細胞的影響姓名：秦潔申請學位級別：碩士專業(yè)：神經病學指導教師：許予明閆福嶺20040520鄭州大學201)4屆碩士研究生學位論文大鼠骨髓問充質干細胞體外誘導向神經細胞分化及神經節(jié)苷脂對神經元樣塋I|I胞的影響的神經元樣細胞的保護作用。為MSCs在神經科學領域的研究和應用奠定實驗基礎。材料與方法：取成年健康SD大鼠股骨和脛骨骨髓，密度梯度離心法分離獲取骨髓

2、單個核細胞(mononuclearcells，MNCs)。多次洗滌后，將細胞沉淀接種于含10％胎牛血清(FBS)的低糖DMEM(LDMEM)培養(yǎng)液中，置于37。C、5％C02、飽和濕度的C02孵箱中培養(yǎng)，細胞融合后用O25％胰酶消化傳代。培養(yǎng)36代的細胞接種于塑料培養(yǎng)皿中，待細胞鋪滿80％培養(yǎng)皿時，采用堿性成纖維生長因子(basicfibroblastgrowthfactorbFGF)培養(yǎng)24h，以促進細胞的增殖。然后實驗組細胞應用二甲

3、亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)和丁羥茴醚(butylatedhydroxyanisole，BHA)對大鼠MSCs(rMSCs)進行體外定向誘導分化；對照組細胞(未誘導細胞)不加任何誘導劑。應用免疫細胞化學方法檢測誘導1h、3h后神經干細胞標記物一巢蛋白(nestin)的表達，以及誘導5h后神經元標記物一神經元特異性烯醇化酶(neuronspecificenolase，NSE)和星形膠質細胞標記物一膠質細胞纖維酸性蛋

4、白(glailfibfillaryacidicprotein，GFAP)的表達，分別計數各種分化細胞的陽性率。誘導5h后，分別用含三種不同濃度GMl的DMEM培養(yǎng)液對分化的細胞進一步培養(yǎng)，另設DMEM組、血清組和誘導液組，分別用不含血清的DMEM培養(yǎng)基、含10％FBS的DMEM培養(yǎng)液和含抗氧化劑的誘導液繼續(xù)培養(yǎng)，24h、48h后分別用免疫細胞化學方法對各組細胞進行NSE鑒定。結果：1分離后的大鼠骨髓MSCs(rMSCs)在體外培養(yǎng)條件下

5、，呈增殖性生長。傳代后的rMSCs約7d左右可擴增一倍。2rMSCs經誘導1h后，即有部分細胞呈現(xiàn)神經元樣形態(tài)，誘導5h結束時，大部分細胞具有典型神經元樣形態(tài)：較多的神經元樣細胞聚集在一起，相鄰細胞間的軸突聯(lián)結成網狀。3對照組rMSCs(未誘導rMSCs)僅表達少量nestin和NSE，陽性率分別為18％O8％和56％29％。實驗組rMSCs誘導1h、3h后nestin陽性率分別為4020／033％和27O％29％，nestin的表達呈