PHBV納米纖維對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化的影響.pdf

1、目的:探究靜電紡絲制備的聚羥基丁酸戊酸共聚酯（Poly-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate，PHBV）納米材料對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)粘附、增殖以及向神經(jīng)元樣細胞分化的影響，為PHBV納米材料與骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)合移植治療脊髓損傷提供新的依據(jù)。
　　方法:取4周齡(100-120g)的SD大鼠，將股骨和脛骨分離出

2、，從中提取骨髓，采用貼壁分離培養(yǎng)的方法分離純化大鼠BMSCs，待細胞融合80％后1∶2分瓶傳代，傳至第3代時，細胞計數(shù)后，以2×104/ml接種至靜電紡絲制備的PHBV納米纖維膜（定向A-NF與非定向R-NF）上，以接種至玻片上為對照組，倒置顯微鏡下觀察對照組細胞形態(tài)。用電鏡觀察細胞與PHBV納米纖維膜的粘附情況，于培養(yǎng)第1、4、7天時，使用細胞計數(shù)試劑盒CCK-8檢測各組細胞增殖情況。待細胞與PHBV納米纖維膜融合后，以維甲酸(RA)

3、作為增殖及分化誘導(dǎo)因子，每孔加入200uL對BMSCs進行增殖培養(yǎng)、分化誘導(dǎo)，倒置顯微鏡下觀察對照組細胞生長形態(tài)的變化，于第2、4、6天將各組細胞采用4％多聚甲醛固定，封閉，用Nestin，MAP-2，GFAP抗體行化學(xué)染色鑒定神經(jīng)干細胞，神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的生成情況。
　　結(jié)果:BMSCs與PHBV納米纖維膜有很好的相容性，定向與非定向PHBV納米纖維膜均能很好的促進細胞增殖，第1天，A-NF與R-NF表面細胞略多于玻片上的細

4、胞，A-NF與玻片上細胞無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，R-NF表面細胞與兩者皆有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，第4天及第7天時，A-NF與R-NF表面細胞顯著增長，其中R-NF表面細胞增殖顯著高于A-NF表面，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且兩者與玻片細胞均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在A-NF表面的細胞沿纖維方向生長，其形態(tài)被顯著拉長。加入維甲酸(RA)誘導(dǎo)劑24h后，細胞形態(tài)開始變化，胞體開始回縮，突起逐漸伸出。免疫熒光染色示PH

5、BV纖維膜上的細胞在第2天即可檢測到Nestin陽性細胞的表達，第4天可檢測到MAP-2，GFAP陽性細胞表達，對照玻片組第4天開始表達Nestin抗體，第6天開始表達MAP-2，GFAP抗體。
　　結(jié)論:A-NF和R-NF均能很好的促進細胞增殖，有良好的相容性，且R-NF表面細胞增殖顯著高于A-NF表面。定向納米纖維通過引導(dǎo)細胞骨架延伸從而對細胞形貌產(chǎn)生顯著影響，使著細胞沿著纖維方向定向生長，這和神經(jīng)細胞軸突定向生長相符合。PH