依那西普對大鼠缺血再灌注后腦組織中MMP-9、ClaudiN-5表達的影響.pdf

1、目的:觀察重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體抗體融合蛋白-依那西普(ETN)對大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損評分、腦含水量以及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、Claudin-5和腫瘤壞死因子(TNF-α)表達的影響，探討缺血再灌注損傷后TNF-α拮抗劑對腦的保護作用及可能的作用機制，為其臨床治療腦缺血再灌注損傷提供依據(jù)。
　　方法:采用線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動脈腦缺血再灌注模型。選用250-300g健康清潔級雄性SD大鼠160只

2、，隨機分為以下各組:正常組(n=10)、假手術(shù)組（sham組）(n=30)、缺血再灌注模型組（I/R組）(n=30)和依那西普治療組（ETN組），ETN組再按劑量不同分為:低劑量組(n=30):ETN0.2mg/kg;中劑量組(n=30):ETN0.4mg/kg;高劑量組(n=30):ETN0.8mg/kg。除正常組外其余各組大鼠按處死時間不同隨機分為缺血2h再灌注1d、2d、5d3個亞組。ETN組在再灌注4h予以不同劑量ETN進行干預

3、（右側(cè)側(cè)腦室注射），假手術(shù)組和模型組予以相同劑量的無菌生理鹽水干預，建模后至處死前，對大鼠進行動態(tài)神經(jīng)功能缺損評分，采用HE染色法觀察病理組織學變化;干濕重法測量腦含水量;應用免疫組織化學法檢測MMP-9、Claudin-5及TNF-α蛋白表達水平的動態(tài)變化，用SPSS17.0進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:
　　1、SD大鼠腦缺血再灌注模型制作成功率為83.77％，死亡率為5.76％。
　　2、正常對照組和假手術(shù)組大鼠無神

4、經(jīng)功能缺損癥狀，模型組和ETN組均有不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀，相同時間點ETN治療組與模型組相比，ETN治療組神經(jīng)功能缺損癥狀減輕，神經(jīng)行為學評分差異有統(tǒng)計學意義，提示ETN能改善神經(jīng)功能缺損癥狀。
　　3、干濕重法結(jié)果顯示，再灌注1d時大鼠的腦組織含水量顯著增加，2d時達到高峰，再灌注5d后含水量下降，但仍高于假手術(shù)組。ETN能顯著減少大鼠腦組織含水量，以中、高劑量組最明顯，中、高劑量組組間無顯著性差異。
　　4、正常組

5、和假手術(shù)組SD大鼠大腦皮層組織形態(tài)結(jié)構(gòu)沒有明顯變化;模型組根據(jù)時間點不同可見膠質(zhì)細胞增生，細胞水腫，神經(jīng)細胞壞死。ETN能減少缺血灶腦組織炎癥反應，減輕腦水腫，以中、高劑量組明顯。
　　5、正常組未見明顯MMP-9免疫陽性細胞表達,假手術(shù)組偶見MMP-9陽性表達，模型組缺血側(cè)MMP-9于再灌注1d時開始升高，2d時達高峰，第5d時表達下降，但仍高于假手術(shù)組，ETN組MMP-9表達變化趨勢與模型組相同，但表達水平均低于模型組。同時間

6、點各ETN組間比較，中、高劑量組MMP-9陽性細胞數(shù)目最少，差異具有統(tǒng)計學意義，中、高劑量組組間無顯著性差異。
　　6、局灶性腦缺血再灌注1d時大鼠腦組織Claudin-5蛋白水平顯著降低，再灌注2d組降低最明顯，再灌注5d組表達增加。ETN治療組各組大鼠腦組織Claudin-5蛋白表達水平增加，以中、高劑量組增加的更明顯，中、高劑量組組間無顯著性差異。
　　7、模型組缺血側(cè)TNF-α于再灌注1d時達高峰，2d及5d表達下降

7、，但仍高于假手術(shù)組，ETN組TNF-α表達變化趨勢與模型組相同，但表達水平均低于模型組。同時間點各ETN組間比較，中、高劑量組TNF-α陽性細胞數(shù)目最少，差異具有統(tǒng)計學意義，中、高劑量組組間無顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1、依那西普對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有神經(jīng)保護作用，其保護作用呈劑量相關(guān)性。
　　2、通過減少MMP-9的表達和增加Claudin-5的表達而維持血腦屏障的完整性可能是依那西普發(fā)揮神經(jīng)保護作用的機