以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的前列腺癌免疫治療的研究.pdf

1、背景及目的： 前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)中最為重要的腫瘤之一。在我國，隨著國民經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展、老齡人口逐年增加，前列腺癌的發(fā)病率呈顯著增長趨勢，有研究顯示國內(nèi)部分地區(qū)的前列腺癌發(fā)病率達(dá)到7.7/10萬，位列全身腫瘤的第7位[1]。前列腺癌的治療方法主要包括外科治療、放療和激素治療，其中外科治療是目前認(rèn)為可以治愈前列腺癌的方法，根治性手術(shù)要考慮腫瘤的臨床分期、預(yù)期壽命和健康狀況。放射治療對(duì)于局限性前列腺癌的療效與根治性手術(shù)相似。內(nèi)

2、分泌治療可以有效的延緩前列腺癌的進(jìn)展，但是經(jīng)過中位時(shí)間14—30個(gè)月后，幾乎所有患者病變都將逐漸發(fā)展為激素非依賴性前列腺癌（androgen—independent prostate cancer，AIPC），在激素非依賴的早期，有些患者對(duì)二線治療仍有反應(yīng)，但最終都將發(fā)展為激素難治性前列腺癌（hormone—refractory prostate cancer，HRPC）[2]。對(duì)于AIPC、HRPC、喪失根治性手術(shù)機(jī)會(huì)和轉(zhuǎn)移的患者目前

3、尚無有效的治療手段，因此如何改善這類前列腺癌患者的預(yù)后、延長患者的生存期一直是國內(nèi)外學(xué)者努力探求的目標(biāo)。 樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）是體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，DC是專職抗原呈遞細(xì)胞（antigen presenting cell；APC），其遞呈抗原，激發(fā)T細(xì)胞增殖的能力是其它抗原遞呈細(xì)胞的100—1000倍[3]，DC不僅可以極其高效的提取、處理、加工和提呈抗原，而且能直接激活初始型T細(xì)胞。研究證明，

4、DC可以啟動(dòng)抗原特異性T細(xì)胞識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。正是因?yàn)镈C在免疫應(yīng)答中的舉足輕重的地位，使其成為免疫學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，尤其是DC瘤苗的研究和應(yīng)用倍受關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)的目的就是研究通過將前列腺癌的RNA負(fù)載DC制備DC瘤苗，并通過多種分子生物學(xué)技術(shù)及免疫學(xué)技術(shù)研究DC瘤苗的分子生物學(xué)特性和抗腫瘤細(xì)胞功能。通過該實(shí)驗(yàn)研究，可能為以DC為基礎(chǔ)的前列腺癌免疫治療提供一條新的治療策略，從而進(jìn)一步應(yīng)用于臨床。 材料與方法： 首先通過密

5、度分離法分離獲得健康志愿者外周血的單核細(xì)胞（peripheral blood monouclear cells，PBMC），用重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rhGM—CSF）和重組人白介—4（rhIL—4）與PBMC共同培養(yǎng)產(chǎn)生DC細(xì)胞。提取前列腺癌PC—3細(xì)胞總RNA致敏DC細(xì)胞并用流式細(xì)胞儀檢測致敏后細(xì)胞及PBMC的表面標(biāo)志物CD14、CD40、CD80、CD86的表達(dá)。致敏后的DC與淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細(xì)胞毒性T淋巴

6、細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），以誘導(dǎo)產(chǎn)生的T淋巴細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，以PC—3前列腺癌細(xì)胞為靶細(xì)胞，共同培養(yǎng)后用MTT細(xì)胞毒檢測試劑盒檢測特異性CTL對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率。最后用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。P值取0.05。 結(jié)果： 總RNA致敏后誘導(dǎo)后的DC細(xì)胞高表達(dá)CD40（63.28±3.74）、CD80（67.79±3.55）和CD86（77.24±3.06），較前CD40（16.1

7、3±1.00）、CD80（13.60±1.28）、CD86（15.76±1.43）相比顯著增高，低表達(dá)CD14（17.45±1.53），較前（42.04±2.89）顯著降低（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。前列腺癌組殺傷率（55.27±9.76）與空白對(duì)照組殺傷率（36.75±7.06）之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.009<0.05）。胃癌對(duì)照組殺傷率（36.75±7.06）與空白對(duì)照組殺傷率（35.66±7.85）之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義