干擾素γ誘導(dǎo)蛋白10基因與腫瘤抗原修飾樹突狀細(xì)胞抗前列腺癌實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:1.構(gòu)建干擾素γ誘導(dǎo)蛋白10(IFN-γinducible protein-10,IP-10)真核表達(dá)質(zhì)粒(IP-10/pcDNA3.1)并大量制備.2.建立從小鼠骨髓前體細(xì)胞中分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)的方法;研究DC發(fā)育、分化和成熟過程中形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及免疫生物學(xué)特性的改變;探討影響DC增殖、分化的有關(guān)因素.3.將RM-1前列腺癌細(xì)胞的裂解產(chǎn)物(Lysate)和IP-10基因共同修飾DC,構(gòu)

2、建前列腺癌DC瘤苗(IP-10/Lysate-DC);體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)檢測該瘤苗抗前列腺癌免疫治療作用及免疫保護(hù)作用.結(jié)論:1.所構(gòu)建的IP-10/pcDNA3.1表達(dá)質(zhì)粒正確.2.小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞在細(xì)胞因子GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)下,通過手法篩選,能擴(kuò)增獲得大量功能性DC.GM-CSF是DC生長的必須因子,GM-CSF和IL-4聯(lián)合應(yīng)用,可增加DC的得率,增強(qiáng)DC的免疫功能.3.通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將IP-10/pcDNA3.1導(dǎo)入DC,

3、獲得有效的IP-10表達(dá),轉(zhuǎn)染DC的上清對T淋巴細(xì)胞有顯著趨化作用.4.RM-1前列腺癌細(xì)胞裂解產(chǎn)物和IP-10基因共同修飾DC所構(gòu)建的前列腺癌DC瘤苗(IP-10/Lysate-DC),能夠明顯刺激T細(xì)胞的增殖,所誘導(dǎo)的特異性CTL分泌IL-2和INF-γ能力增強(qiáng),對RM-1細(xì)胞具有顯著殺傷作用.5.將IP-10/Lysate-DC瘤苗回輸體內(nèi),可產(chǎn)生抗前列腺癌免疫治療作用,荷瘤小鼠腫瘤生長減慢,生存期延長;腫瘤組織出現(xiàn)壞死和炎細(xì)胞浸