內(nèi)毒素對(duì)奶牛乳腺組織免疫活化狀態(tài)及乳脂肪和乳蛋白合成的影響及其控制.pdf

1、本試驗(yàn)旨在研究?jī)?nèi)毒素(LPS)對(duì)奶牛乳腺組織免疫狀態(tài)及乳脂肪和乳蛋白合成的影響以及維生素E、丙酮酸乙酯和谷氨酰胺緩解內(nèi)毒素作用的效果，為減少內(nèi)毒素對(duì)乳腺泌乳性能的影響提供試驗(yàn)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)一:以泌乳荷斯坦奶牛乳腺組織塊為模型，研究?jī)?nèi)毒素對(duì)奶牛乳腺組織中酪蛋白、甘油三酯、白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8以及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）合成量及Toll樣受體4(TLR4)、細(xì)胞核因子-κBp65(NF-κBp65)、過(guò)

2、氧化物酶增殖體激活受體γ(PPARγ)、細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α)以及酪蛋白和脂肪合成酶基因mRNA表達(dá)的影響。生長(zhǎng)培養(yǎng)基中分別添加0、1、10、100、1000 ng/mL的內(nèi)毒素，培養(yǎng)72 h，收集乳腺組織，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定。結(jié)果顯示:(1)1 ng/mL內(nèi)毒素極顯著提高奶牛乳腺組織中TNF-α基因的表達(dá)量(P＜0.01)，顯著提高IL-6的基因表達(dá)量（P＜0.05），極顯著降低了乙酰輔酶A羧化酶A(A

3、CACA)、脂肪酸合酶(FASN)、長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A合成酶3(ACSL3)、αs1-酪蛋白(CSN1S1)、β-酪蛋白(CSN2)基因的表達(dá)量(P＜0.01)。(2)10 ng/mL內(nèi)毒素顯著提高奶牛乳腺組織中NF-κBp65基因的表達(dá)量(P＜0.05)，極顯著提高奶牛乳腺組織中TNF-α、IL-6、IL-8基因的表達(dá)量(P＜0.01)，對(duì)IL-1β基因表達(dá)量有提高的趨勢(shì)(P＞0.05)，極顯著降低了乳脂肪(ACACA、FASN、ACSL

4、3)、乳蛋白(CSN1S1、CSN2)的基因表達(dá)量(P＜0.01)，顯著降低了κ-酪蛋白(CSN3)的基因表達(dá)量（P＜0.05）。(3)100 ng/mL和1000 ng/mL的內(nèi)毒素與10 ng/mL的內(nèi)毒素差異不顯著（P＞0.05）。(4)1 ng/mL的內(nèi)毒素顯著提高了乳腺組織中IL-1β的合成(P＜0.05)，對(duì)IL-6、IL-8、TNF-α的合成有提高的趨勢(shì)（P＞0.05），對(duì)甘油三酯和酪蛋白的合成有降低的趨勢(shì)（P＞0.05）

5、。(5)10 ng/mL內(nèi)毒素極顯著提高了IL-1β、IL-6、TNF-α的合成（P＜0.01），顯著提高了IL-8的合成量（P＜0.05），對(duì)甘油三酯的合成有降低的趨勢(shì)（P＞0.05），極顯著降低了酪蛋白的合成（P＜0.01）。(6)100 ng/mL和1000 ng/mL的內(nèi)毒素對(duì)IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、甘油三酯以及酪蛋白的作用效果與10 ng/mL的內(nèi)毒素差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明:培養(yǎng)基中添加內(nèi)毒素

6、使奶牛乳腺組織中的免疫活化狀態(tài)升高、乳脂肪和乳蛋白合成降低。
　　實(shí)驗(yàn)二:以泌乳荷斯坦奶牛乳腺組織塊為模型，在含10 ng/mL內(nèi)毒素的情況下，研究添加維生素E、丙酮酸乙酯、谷氨酰胺對(duì)乳腺組織中酪蛋白、甘油三酯、細(xì)胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α）合成量及TLR4、NF-κBp65、PPARγ、細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α)以及酪蛋白和脂肪合成酶基因mRNA表達(dá)的影響，并對(duì)這三種物質(zhì)所產(chǎn)生

7、的效果進(jìn)行比較。該試驗(yàn)分為4個(gè)處理（10 ng/mL的LPS;10ng/mL的LPS+4 IU的生育酚乙酸酯;10 ng/mL的LPS+1 mmol/L的丙酮酸乙酯;10 ng/mL的LPS+1 mmol/L的谷氨酰胺），培養(yǎng)72h，檢測(cè)上述相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示:(1)維生素E顯著降低了乳腺組織中NF-κBp65、IL-1β、IL-8基因的表達(dá)量（P＜0.05），對(duì)于IL-6基因的表達(dá)量有降低的趨勢(shì)（P＞0.05）;谷氨酰胺顯著降低了乳腺

8、組織中TLR4、IL-8基因的表達(dá)量（P＜0.05）;丙酮酸乙酯顯著降低了IL-1β、IL-8基因表達(dá)量(P＜0.05)，但效果沒(méi)有維生素E好。(2)維生素E顯著提高了乳腺組織中ACACA基因的表達(dá)量(P＜0.05);谷氨酰胺顯著提高了FASN基因的表達(dá)量(P＜0.05);丙酮酸乙酯有提高ACACA以及FASN基因的表達(dá)量的趨勢(shì)(P＞0.05)，極顯著提高了ACSL3基因的表達(dá)量（P＜0.01）。(3)維生素E極顯著提高了乳腺組織中乳蛋

9、白CSN1S1、CSN2、CSN3基因的表達(dá)量(P＜0.01);谷氨酰胺和丙酮酸乙酯極顯著提高了CSN2、CSN3基因的表達(dá)量(P＜0.01)。(4)維生素E對(duì)乳腺組織中IL-1β的合成有降低的趨勢(shì)（P＞0.05），顯著降低IL-6的合成(P＜0.05)，極顯著降低IL-8的合成(P＜0.01)，極顯著提高酪蛋白的合成（P＜0.01）;谷氨酰胺極顯著降低IL-8的合成(P＜0.01)，極顯著提高酪蛋白的合成(P＜0.01);丙酮酸乙酯有