二、三維培養(yǎng)條件下,添加乙酸鈉和β-羥丁酸鈉對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳脂肪合成的影響.pdf

1、本論文研究二維培養(yǎng)模式下，添加不同濃度的乙酸鈉(0、6、9、12、15 mmol/L)和β-羥丁酸鈉(0、0.8、1.6、2.4mmol/L)及二者的不同配比(1∶1、2∶1、4∶1)對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞(BMECs)乳脂、乳蛋白合成的影響，篩選出能夠促進(jìn)乳脂肪和乳蛋白合成的適宜乙酸鈉和β-羥丁酸鈉濃度及二者配比，進(jìn)行BMECs三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，并從乳脂、乳蛋白合成相關(guān)基因和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子基因表達(dá)水平，初步探明短鏈脂肪酸調(diào)控乳脂和乳蛋白合成的分

2、子機(jī)制，為改善乳成分提供依據(jù)。論文包含三個(gè)實(shí)驗(yàn)。
　　實(shí)驗(yàn)一本實(shí)驗(yàn)包含兩部分。第一部分研究在二維培養(yǎng)條件下，添加不同濃度乙酸鈉(0、6、9、12、15 mmol/L)對(duì)BMECs，細(xì)胞活力，甘油三酯(TAG)含量乳脂肪、乳蛋白合成相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，乙酸鈉濃度為12mmol/L時(shí)，BMECs中TAG含量顯著高于對(duì)照組及6、9、15 mmol/L乙酸鈉處理組(P＜0.05)。乙酸鈉濃度為12～15mmol/L時(shí)，ACC，A

3、CSS2，F(xiàn)AS，DGAT，PPARG，SREBP1，Akt-1和mTOR基因的相對(duì)表達(dá)量較高。乙酸鈉濃度為6mmol/L時(shí)，CSN1S1基因的相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組及9、12、15 mmol/L乙酸鈉處理組(P＜0.05)。第二部分內(nèi)容根據(jù)第一部分研究篩選出的適宜乙酸鈉濃度同時(shí)進(jìn)行BMECs的二維和三維培養(yǎng)（乙酸鈉添加濃度為0 mmol/L和12mmol/L），比較不同培養(yǎng)模式下BMECs培養(yǎng)基中TAG含量以及乳脂肪、乳蛋白合成相關(guān)

4、基因的表達(dá)的差異。結(jié)果表明，在三維培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)基中TAG的含量顯著高于二維培養(yǎng)模式(P＜0.05);對(duì)照組和乙酸鈉處理組(12mmol/L)對(duì)BMECs各個(gè)基因的表達(dá)量均顯著高于二維培養(yǎng)模式(P＜0.001)。在乙酸鈉處理組中，與二維培養(yǎng)模式相比，乳脂合成相關(guān)基因ACC、FAS的表達(dá)量分別增加了170.74倍、97.39倍，乳脂合成調(diào)控因子SREBP-1、PPARG的表達(dá)量分別增加了96.9倍、149.52倍，乳蛋白合成過程相關(guān)基因

5、CSN1S1、CSN3的表達(dá)量分別增加了160.33倍、109.15倍。在對(duì)照組中，與二維培養(yǎng)模式相比，乳脂合成相關(guān)基因ACC、FAS的表達(dá)量分別增加了67.67倍、37.34倍，乳脂合成調(diào)控因子SREBP-1、PPARG基因的表達(dá)量分別增加了23.9倍、69.85倍，乳蛋白合成過程相關(guān)基因CSN1S1、CSN3的表達(dá)量分別增加了82.64倍、65.72倍。
　　實(shí)驗(yàn)二本實(shí)驗(yàn)包含兩部分。第一部分研究在二維培養(yǎng)條件下，添加不同濃度β

6、-羥酸鈉(0、0.8、1.6、2.4mmol/L)對(duì)BMECs細(xì)胞活力，TAG含量，乳脂肪、乳蛋白合成相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，β-羥丁酸鈉濃度為2.4mmol/L時(shí)，BMECs中TAG含量顯著高于0.8、1.6 mmolβ-羥酸鈉處理組（P＜0.05）。β-羥丁酸鈉濃度為1.6～2.4mmol/L時(shí)，ACC，ACSS2，F(xiàn)AS，SREBP1基因的相對(duì)表達(dá)量較高。β-羥丁酸鈉濃度為0.8mmol/L時(shí)，DGAT，CD36、PPARG

7、，Akt-1、mTOR基因表達(dá)量顯著高于對(duì)照組及1.6、2.4 mmol/L乙酸鈉處理組（P＜0.05）。β-羥丁酸鈉處理組 CSN1S1，CSN3基因的相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組。第二部分內(nèi)容根據(jù)第一部分研究篩選出的適宜β-羥丁酸鈉濃度同時(shí)進(jìn)行BMECs的二維和三維培養(yǎng)(β-羥丁酸鈉添加濃度為0 mmol/L和2.4mmol/L)，比較不同培養(yǎng)模式下BMECs培養(yǎng)基中TAG含量以及乳脂肪、乳蛋白合成相關(guān)基因的表達(dá)的差異。結(jié)果表明，在三維培

8、養(yǎng)條件下，培養(yǎng)基中TAG的含量也顯著高于二維培養(yǎng)模式(P＜0.05);對(duì)照組和β-羥丁酸鈉處理組(2.4mmol/L)對(duì)BMECs各個(gè)基因的表達(dá)量均顯著高于二維培養(yǎng)條件下(P＜0.001)。在β-羥丁酸鈉處理組中，與二維培養(yǎng)模式相比，乳脂合成相關(guān)基因ACC、FAS的表達(dá)量分別增加了142.63倍、56.29倍，乳脂合成調(diào)控因子SREBP-1、PPARG基因的表達(dá)量分別增加了118.56倍、31.69倍，乳蛋白合成過程相關(guān)基因CSN1S1

9、的表達(dá)量分別增加了51.71倍。
　　試驗(yàn)三本實(shí)驗(yàn)包含兩部分。第一部分研究在二維培養(yǎng)條件下，研究添加不同配比的乙酸鈉和β-羥丁酸鈉(0、1∶1、2∶1、4∶1)對(duì)BMECs細(xì)胞活力，TAG含量，乳脂肪、乳蛋白合成相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，乙酸鈉和β-羥丁酸鈉的配比為2∶1和4∶1時(shí)，乳腺上皮細(xì)胞中TAG含量顯著高于對(duì)照組和1∶1組(P＜0.05)，而2∶1和4∶1組之間差異不顯著(P＞0.05)。與對(duì)照組相比，乙酸鈉與β-羥丁

10、酸鈉配比試驗(yàn)組均不同程度的促進(jìn)了乳脂合成相關(guān)基因的表達(dá)(P＜0.05)。第二部分內(nèi)容根據(jù)第一部分研究篩選出的適宜乙酸鈉和β-羥丁酸鈉配比同時(shí)進(jìn)行BMECs的二維和三維培養(yǎng)（乙酸鈉和β-羥丁酸鈉配比為2∶1），比較不同培養(yǎng)模式下BMECs培養(yǎng)基中TAG含量以及乳脂肪、乳蛋白合成相關(guān)基因的表達(dá)的差異。結(jié)果表明，在三維培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)基中TAG的含量也顯著高于二維培養(yǎng)(P＜0.05)。不同配比的乙酸鈉和β-羥丁酸鈉處理組與對(duì)照組BMECs乳脂

11、肪、乳蛋白合成相關(guān)基因的表達(dá)量均顯著高于二維培養(yǎng)模式(P＜0.001)。在配比處理組中，與二維培養(yǎng)模式相比，乳脂合成相關(guān)基因ACC、FAS的表達(dá)量分別增加了179.25倍、53.25倍，乳脂合成調(diào)控因子SREBP-1、PPARG基因的表達(dá)量分別增加了107.31倍、213.72倍，乳蛋白合成過程相關(guān)基因CSN1S1的表達(dá)量增加了144.75倍。
　　綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在三維培養(yǎng)條件下，添加不同短鏈脂肪酸及其配比對(duì)BMECs乳脂、乳