靶向PEA-PPAR-α通路的新型NAAA抑制劑鎮(zhèn)痛抗炎作用及機制研究.pdf

1、據(jù)不完全統(tǒng)計，疼痛的全球發(fā)病率高達35-45％。由于疼痛種類多，誘因復雜，發(fā)病機制仍不完全清楚，目前治療疼痛的藥物不僅非常有限，而且副作用較多，遠未滿足疼痛治療的需求。新型、安全有效的鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)具有優(yōu)良的應用前景及市場價值。
　　N-棕櫚酰乙醇胺(N-palmitoylethanolamide，PEA)是一種內(nèi)源性的脂質(zhì)，廣泛存在于神經(jīng)細胞、小膠質(zhì)細胞、免疫細胞等與炎癥、疼痛相關的組織細胞中。研究證明，PEA通過激活過氧化物酶體

2、增殖物活化受體α(Peroxisomeproliferator-activated receptor，PPAR-α)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛抗炎的作用。PEA在組織及細胞中并不蓄積，而是受到相應的合成酶及水解酶的調(diào)控維持正常水平。N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(N-acylethanolamine acid amidase，NAAA)能特異性將PEA水解成棕櫚酸和乙醇胺，使其失活。NAAA歸屬于膽酰甘氨酸水解酶家族，主要分布于外周免疫系統(tǒng)，通過抑制NAAA活

3、性，能選擇性作用于外周免疫細胞，抑制PEA降解，通過激活PPAR-α發(fā)揮鎮(zhèn)痛抗炎的作用，從理論上避免潛在的中樞副作用。
　　目前報道的NAAA抑制劑存在活性或穩(wěn)定性的不足，成藥性較差。β-丁內(nèi)酯類NAAA抑制劑雖然活性較高，但化合物本身穩(wěn)定性及生物穩(wěn)定性極差，無法用于口服或整體動物實驗。為了解決這些問題，本文通過建立NAAA抑制劑高通量篩選模型，從天然產(chǎn)物中篩選出具有一定活性的先導化合物，通過結(jié)構(gòu)修飾和改造，獲得了活性強、穩(wěn)定性高

4、的NAAA抑制劑，以系統(tǒng)給藥方式進行鎮(zhèn)痛抗炎評價。本文應用受體阻斷劑和基因敲除鼠，首次在動物體內(nèi)證明了NAAA-PEA-PPAR-α通路在鎮(zhèn)痛抗炎中發(fā)揮的作用，為新型鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)提供了科學的思路和研究基礎。
　　本文主要完成以下三方面工作內(nèi)容:
　　一、NAAA抑制劑篩選模型的構(gòu)建
　　構(gòu)建HEK293-NAAA高表達細胞株，應用LC-MS為檢測手段，建立NAAA抑制劑高通量篩選模型。應用該模型，對傳統(tǒng)中草藥活性成分

5、及基于先導化合物的優(yōu)化產(chǎn)物進行篩選評價。
　　二、?；量┩轭怤AAA抑制劑的抗炎作用研究
　　以?；量┩轭怤AAA抑制劑Compound16（IC50=2.12μM）為代表，應用docking模型研究了其與NAAA活性催化中心的作用方式，發(fā)現(xiàn)Asn209殘基在水解中的作用;動力學研究表明Compound16可逆、非競爭性抑制NAAA活性，通過抑制PEA的降解，顯著抑制脂多糖(LPS)誘導的RAW264.7細胞炎癥因子的表

6、達。
　　三、噁唑烷酮酰亞胺類NAAA抑制劑鎮(zhèn)痛抗炎及機制研究
　　對基于Compound16重新設計合成的新型噁唑烷酮酰亞胺類NAAA抑制劑進行篩選評價，優(yōu)選出目標化合物(Hits) F96(IC50=0.27μM)為可逆、競爭性的NAAA抑制劑。F96的特點是第一個適用于整體動物給藥的納摩爾級NAAA抑制劑。動物腹腔注射給藥可顯著抑制TPA誘導的小鼠耳炎性腫脹、醋酸、福爾馬林誘導的炎性疼痛、以及小鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷