FGFR1在胃癌中的作用及靶向FGFR1抑制劑抗胃癌的活性和機制研究.pdf

1、目的：
　　1、探討FGFR1在胃癌中的表達情況及在胃癌中的作用;
　　2、探索靶向FGFR1抑制劑L6123和AZD4547的抗胃癌活性及機制。
　　方法：
　　(1)提取胃癌手術后切除下來的胃癌及癌旁正常組織中RNA和蛋白，用RT-PCR和Western Blotting方法分別檢測組織標本中FGFR1mRNA以及FGFR1蛋白的表達情況;(2)提取胃癌細胞SGC-7901、BGC-823、MGC-803，小

2、鼠胚胎成纖維細胞Balb/c3T3及人正常胃粘膜上皮細胞GES-1的蛋白，用WesternBlotting檢測FGFR1蛋白的表達情況;用MTT方法探索上述幾種細胞對FGF2敏感性;用siRNA技術探索FGFR1在胃癌細胞增殖中起到的作用;用MTT方法檢測FGFR抑制劑AZD4547的體外抗胃癌活性;(3)研究體內(nèi)動物模型中FGFR抑制劑AZD4547抗胃癌活性，選用Nu/nu BALB/c裸鼠建立SGC-7901異位移植瘤的裸小鼠腫瘤

3、模型，以劑量為20mg/kg/day的AZD4547給藥，計算相對腫瘤體積、瘤重率，用Western Blotting檢測FGFR信號通路的抑制情況以及免疫組化的方法研究FGFR抑制劑AZD4547的體內(nèi)抗胃癌增殖活性;(4)用MTT探索新型非ATP競爭性靶向FGFR1抑制劑L6123抗胃癌細胞增殖的效果以及L6123的靶向選擇性;(5)用Western Blotting進行探索細胞層面上L6123抗胃癌的機制;(6)用Western

4、Blotting、Hoechst33258染色法和流式細胞技術探索L6123對胃癌細胞凋亡的影響及其機制;(7)用Transwell小室進行探索L6123對胃癌細胞侵襲能力的影響。
　　結果：
　　(1)與癌旁組織相比，胃癌組織中相對FGFR1mRNA表達明顯升高(P=0.0425＜0.05)，高表達率為54.21％（高出一倍以上的，定義為高表達）;除在mRNA層面上檢測外，還隨機抽取12對組織標本，進行FGFR1蛋白層面表

5、達情況的檢測，發(fā)現(xiàn)在胃癌組織標本中FGFR1在mRNA和蛋白層面都存在高表達。
　　(2)與正常人胃粘膜上皮細胞GES-1相比，胃癌細胞SGC-7901、BGC-823、MGC-803的FGFR1蛋白是高表達的，并且高表達FGFR1的細胞對FGF2的刺激更加敏感;胃癌細胞增殖生長曲線提示，用siRNA技術沉默胃癌細胞中FGFR1的表達后，相比較于空白組和轉(zhuǎn)染NC組，轉(zhuǎn)染siRNA-FGFR1組細胞增殖明顯受抑制;此外，F(xiàn)GFR抑制

6、劑AZD4547在三株胃癌細胞中均表現(xiàn)出良好的抗胃癌增殖活性。
　　(3)體內(nèi)抗胃癌活性實驗結果表明，F(xiàn)GFR抑制劑AZD4547不但能抑制胃癌腫瘤組織生長，抑瘤率為68.36％，還能有效的抑制FGFR1信號通路相關蛋白以及增殖指標Ki67的表達;
　　(4)與NDGA相比，L6123在三種胃癌細胞（SGC-7901、BGC-823和MGC-803）中均表現(xiàn)出良好的抗增殖作用;且對小鼠胚胎成纖維野生型細胞MEF-WT的抗增殖

7、活性要強于小鼠胚胎成纖維FGFR1/FGFR2/FRS2α敲除型細胞MEF-FGFR1-FGFR2-FRS2α-KO;觀察對這兩種細胞IC50值的差異，可以發(fā)現(xiàn)L6123的靶向選擇性要優(yōu)于NDGA; FGFR1的敲除可以抑制L6123的抗增殖活性;
　　(5)L6123在抑制胃癌細胞增殖的同時可以有效抑制FGFR1信號通路相關蛋白的表達;L6123通過上調(diào)促凋亡蛋白Cleaved-caspase3、pro-caspase-3和BC

8、L-2，同時下調(diào)抗凋亡蛋白cleaved-PARP的表達來誘導胃癌細胞的凋亡;L6123除可以誘導胃癌細胞的凋亡外，還可以抑制胃癌細胞的侵襲。
　　結論：
　　(1)FGFR1在部分人胃癌組織和胃癌細胞株中是高表達的，對于FGFR1高表達的胃癌，沉默F(xiàn)GFR1表達可有效抑制胃癌細胞增殖，因此FGFR1可能是治療胃癌的一個新靶點;(2)ATP競爭性FGFR抑制劑AZD4547在體內(nèi)外均表現(xiàn)出良好的抗胃癌增值效果;新型非ATP競