噁唑烷酮類NAAA抑制劑抗中樞炎癥的藥效評價與機制研究.pdf

1、研究背景:目前研究證明在多種中樞系統疾病中都存在炎癥過程，學界普遍認可中樞系統炎癥與膠質細胞過度激活有關。N-棕櫚酰乙醇胺(N-palmitoylethanolamide，PEA)是一種近年來備受關注的內源性脂質，多項臨床研究及基礎研究證明，PEA可以通過激活PPAR-α有效抑制中樞膠質細胞的活化，緩解多種中樞系統性疾病?？梢酝ㄟ^抑制PEA特異性水解酶N-酰基乙醇胺（NAAA）的活性提高體內PEA的水平，為治療中樞炎癥提供有效策略。然而

2、，由于缺乏NAAA敲除鼠和生物學穩(wěn)定的NAAA抑制劑，NAAA-PEA途徑在中樞的作用和機制目前尚不清楚。
　　目的:通過課題組前期設計合成的新型噁唑烷酮類NAAAA抑制劑F96，初步評價抗中樞炎癥藥效與機制，為臨床治療中樞炎癥相關疾病提供新的治療靶標，同時也為發(fā)展具有自主知識產權的創(chuàng)新藥物奠定理論和實驗基礎。
　　方法:以F96為工具藥物，通過建立LPS誘導RAW264.7巨噬細胞、小鼠腹腔原代巨噬細胞以及小鼠原代小膠質細

3、胞炎癥模型，TPA誘導的小鼠耳腫脹炎癥模型和LPS誘導小鼠系統性炎癥模型，使用Real-Time PCR法和ELISA法檢測炎癥因子的表達，評價NAAA抑制劑在外周與中樞的抗炎作用;使用LC-MS檢測機體內F96分布、內源性脂質的含量變化、評價NAAA活性，研究F96對內源性脂質及其代謝酶的影響;使用Western Blot檢測腦內GFAP、PPAR-α和TLR-4等蛋白表達，使用免疫熒光檢測腦內Iba-1蛋白的表達，使用PPAR-α基

4、因敲除鼠，研究NAAA-PEA-PPAR-α途徑對中樞炎癥的作用與機制。
　　結果:F96能夠有效抑制LPS誘導的RAW246.7巨噬細胞與小鼠腹腔原代巨噬細胞炎癥因子TNF-α與IL-6基因與蛋白的表達;F96可以有效抑制LPS誘導的系統性炎癥與TPA誘導的小鼠炎性耳腫脹并降低促炎性因子的表達，在外周與中樞系統均可以發(fā)揮抗炎作用;F96在機體內主要分布在NAAA高表達的外周系統，但可以通過血腦屏障，在腦內有一定分布;F96可以提

5、高中樞PEA水平，提高PPAR-α表達，下調TLR-4蛋白，發(fā)揮抗炎作用;在PPAR-α敲除鼠中F96抗中樞炎癥的作用完全消失，表明了PPAR-α介導了F96的抗炎作用，同時熒光素酶報告基因和蛋白結合實驗證明，F96不是PPAR-α的直接激動劑;F96在機體內對其他內源性脂質AEA、2-AG與OEA沒有顯著影響，可避免不必要的中樞副作用;F96能夠顯著降低GFAP和Iba-1以及LPS誘導的原代小膠質細胞炎癥因子的表達。
　　結論