產(chǎn)氣氣桿菌產(chǎn)普魯蘭酶的發(fā)酵及酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文對一株高產(chǎn)普魯蘭酶的產(chǎn)氣氣桿菌TCCC11061發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化,通過單因素試驗與正交試驗相結(jié)合確定最佳培養(yǎng)基配比為(g/L):玉米淀粉15,豆餅粉10,CH3COONH48,KeHPO4·3H2O0.5,MgSO4·7H2O0.5,KC10.5,F(xiàn)eSO4·7H2O0.05;同時對接種條件和搖床條件進行了優(yōu)化,確定搖瓶發(fā)酵條件:搖床轉(zhuǎn)速180r/mim,種齡12h,接種量3%,裝液量100mL/500mL。在優(yōu)化后的培養(yǎng)基及培

2、養(yǎng)條件下,普魯蘭酶活力達到42.14U/mL。此外,研究并確定了7L發(fā)酵罐的發(fā)酵條件,控制pH7.5左右,溶氧5%~15%,總糖濃度在0.6%,30℃發(fā)酵55h,酶活力最高可達54.64U/mL。
   將TCCC11061的發(fā)酵液分別經(jīng)過離心除菌體、硫酸銨分段鹽析、透析袋透析脫鹽、DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析、Sephadex G-75柱層析等步驟獲得電泳純的普魯蘭酶,使用聚丙烯酰胺凝膠電泳測得

3、分子量約為42~45kDa。以普魯蘭為底物時,TCCC11061普魯蘭酶的Km為3.5×10-3g/mL。研究該菌株所產(chǎn)普魯蘭酶的酶學(xué)性質(zhì)發(fā)現(xiàn),最適作用pH為5.8,最適反應(yīng)溫度為55℃,在pH4.5~6.5、40℃以下都較穩(wěn)定,對1mol/L H2O2具有一定的耐受性。Ca2+和Mg2+離子對該酶具有保護作用,而EDTA、異丙醇和乙醇對該酶有明顯的抑制作用。
   初步建立了液體普魯蘭酶提取工藝流程,發(fā)酵液→凝聚→過濾→超濾濃

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