人谷胱甘肽過氧化物酶-7原核表達(dá)、純化及功能研究.pdf

1、谷胱甘肽過氧化物酶7(Glutathione peroxidase7，GPx7)的體外GPx活性較低，但其在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著獨(dú)特的生理活性。利用原核細(xì)胞表達(dá)人源 GPx7，使其在細(xì)胞外針對 ROS而發(fā)揮的抑制腫瘤增殖和促進(jìn)骨髓損傷的修復(fù)作用是一個新穎的、值得研究的問題。本論文研究了GPx7原核表達(dá)載體的構(gòu)建、原核細(xì)胞表達(dá)、蛋白純化、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和對小鼠化療藥物骨髓損傷的再生的影響，以及細(xì)胞內(nèi)外的抗氧化活性。
　　人源GPx7基因片

2、段重組入原核表達(dá)質(zhì)粒pET24a，成功構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET24a-GPx7，在大腸桿菌宿主BL21(DE3)中經(jīng)誘導(dǎo)以可溶形式表達(dá)。初步建立了 Sulfopropyl陽離子交換和Superdex75分子排阻2步層析法純化E.coli BL21(DE3)表達(dá)的GPx7，SDS-PAGE電泳結(jié)果為單一條帶的蛋白質(zhì)經(jīng)Western blotting鑒定為GPx7。GPx7對腫瘤細(xì)胞生長具有一定的抑制作用。在A549腫瘤細(xì)胞中轉(zhuǎn)染真細(xì)胞表達(dá)質(zhì)

3、粒pCDNA3.1(-)-GPx7，瞬時高表達(dá)的GPx7顯著抑制腫瘤細(xì)胞的體外增殖(p<0.05)。GPx7對 S180荷瘤小鼠的腫瘤抑制率為29.26％。GPx7能緩解化療藥物5-FU對骨髓細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，在5-FU化療藥物骨髓損傷模型小鼠中，注射GPx7后在第9、11、13天能顯著促進(jìn)骨髓損傷小鼠的骨髓細(xì)胞再生(p<0.05)，最終顯著增加損傷小鼠外周血白細(xì)胞和血小板的數(shù)量。過表達(dá) GPx7的肺癌細(xì)胞 A549增殖受到抑制，同時