金銀花中多酚氧化酶和過(guò)氧化物酶的分離純化及特性研究.pdf

1、本研究以山東亞特良種金銀花為原料,采用硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE纖維素-52離子交換柱分離純化金銀花中PPO和POD,并分別對(duì)這兩種酶的分子量和特性進(jìn)行了研究,包括溫度和pH值對(duì)酶活性的影響,酶活性對(duì)溫度和pH值的穩(wěn)定性,底物的專一性,金屬離子及抑制劑對(duì)酶活性的影響,為金銀花貯藏和加工過(guò)程中的酶促褐變的抑制提供科學(xué)依據(jù)。通過(guò)分析,主要研究結(jié)果如下:
　　1、通過(guò)硫酸銨分級(jí)沉淀和離子交換層析,金銀花PPO純化倍數(shù)為30.76,回收率3

2、3.8％,分子量約為49kDa。金銀花POD純化倍數(shù)28.95,回收率17.52,變性分子量約為20.4kDa。
　　2、金銀花PPO粗酶液最適反應(yīng)溫度為30℃;20℃、30℃加熱60min剩余相對(duì)酶活力分別為80%和53%;40℃、50℃加熱60min后相對(duì)殘余酶活力低于40%;60℃處理60min相對(duì)殘余酶活力為10%;70℃時(shí)酶活力幾乎完全喪失。金銀花PPO最適反應(yīng)pH值為7.5,在pH值7.5~9.5較穩(wěn)定,相對(duì)殘余酶活力

3、大于90%。金銀花POD粗酶液最適反應(yīng)溫度為30℃;20℃、30℃加熱60min殘余酶活力在90%以上,60℃處理60min相對(duì)殘余酶活力小于10%;金銀花POD最適反應(yīng)pH值為5.5,在pH值8.0時(shí)較穩(wěn)定。
　　3、金銀花PPO屬于雙酚氧化酶,可以氧化臨位雙酚(鄰苯二酚、L-dopa、綠原酸),不能氧化單酚(L-tyrosine)和三酚(沒食子酸、焦性沒食子酸、甲基沒食子酸)。金銀花POD具有廣泛的底物特性,在H2O2條件下可

4、以氧化酚類和芳香胺類化合物(愈創(chuàng)木酚、鄰苯二酚、阿魏酸、咖啡酸、綠原酸、焦性沒食子酸、鄰聯(lián)茴香胺、聯(lián)苯胺)。
　　4、金屬離子Na+、K+對(duì)金銀花PPO酶活力沒有影響;Mn2+、Mg2+、Ca2+、Zn2+有激活作用;Cu2+、Co2+表現(xiàn)為抑制作用。SDS對(duì)PPO活力有激活作用;亞硫酸鈉、檸檬酸、抗壞血酸、曲酸和托酚酮對(duì)PPO有不同程度的抑制作用。金屬離子Na+對(duì)金銀花POD酶活力沒有影響;Ca2+、Zn2+有激活作用,而K+、