JNK介導的腦缺血性神經(jīng)元凋亡下游信號通路及其調控機制的研究.pdf

1、大量研究表明腦缺血再灌注可以激活JNK，而且JNK激活在局灶和全腦缺血介導的神經(jīng)元凋亡過程中發(fā)揮重要作用。但是，腦缺血誘導JNK激活的下游凋亡信號通路還有待進一步闡明。本文采用SD大鼠四動脈結扎全腦缺血模型，并利用含有GluR6羧基末端九個氨基酸的融合肽Tat-lGluR6-9c、JNK小分子抑制劑、PTEN抑制劑和PI3K特異性抑制劑，探討了腦缺血GluR6介導的JNK激活的下游神經(jīng)元凋亡信號通路以及Akt對下游凋亡通路的調控機制。

2、 1．腦缺血GluR6介導的JNK激活下游神經(jīng)元凋亡信號通路 為了研究腦缺血KA受體亞基GluR6介導的JNK激活下游神經(jīng)元凋亡信號通路，我們采用SD大鼠四動脈結扎全腦缺血模型，于缺血前40分鐘腦室注射Tat-G1uR6-9c，以免疫沉淀、免疫印跡和免疫組織化學方法研究蛋白間的相互結合及蛋白活性的變化。結果顯示腦缺血／再灌注過程中，Tat-GluR6-9c一方面抑制了JNK的底物c-Jun的磷酸化以及隨后引起的Fas-L

3、表達的上調，另一方面還抑制了JNK胞漿底物14-3-3的磷酸化，減少了Bax從14-3-3／Bax二聚體上分離轉位到線粒體以及線粒體內細胞色素c的釋放，最終抑制了caspase-3的激活。我們的結果提示含有GluR6的KA受體介導的JNK激活最終是通過死亡受體通路和線粒體通路參與腦缺血／再灌注誘導的海馬神經(jīng)元凋亡的。 2．Akt1和JNK1/2介導的Bad磷酸化在缺血性腦損傷中起相反作用 為了研究Aktl和JNKl/2介

4、導的Bad通路在腦缺血/再灌注誘導的海馬神經(jīng)元凋亡中的作用，我們采用SD大鼠四動脈結扎全腦缺血模型，于缺血前20分鐘腦室注射SP600125或LY294002，或缺血前分五次腹腔注射bpV(pic)，用免疫沉淀、免疫印跡和組織學方法檢測胞漿和線粒體中蛋白激酶、蛋白表達以及蛋白間相互作用的變化。結果顯示JNK抑制劑SP600125抑制了腦缺血/再灌注海馬CAl區(qū)神經(jīng)元Bad(S128)的磷酸化，而對Bad(S136)磷酸化沒有影響，但增加

5、了p-Bad(S136)與14-3-3的結合，減少了Bad與Bcl-Xl的結合，明顯抑制了線粒體中細胞色素C的釋放和caspase-3的激活，促進了神經(jīng)元的存活；PTEN抑制劑bpV(pic)激活了Aktl，促進了Bad(S136)的磷酸化，抑制了JNKI/2和Bad(S128)的激活，增加了腦缺血復灌后海馬CAl區(qū)p-Bad(S136)與14-3-3的結合，減少了Bad與Bcl-Xl的結合，抑NT線粒體中細胞色素C的釋放和caspas

6、e-3的激活，保護神經(jīng)元免受缺血損傷，而P13K特異性抑制劑LY294002可以逆轉bpV(pic)的上述作用。我們的結果提示Aktl和JNKl/2對Bad兩個不同絲氨酸位點的磷酸化在缺血神經(jīng)元的損傷中起到了相反的作用。 綜上所述，腦缺血GluR6介導了JNK的激活，并進一步通過死亡受體通路和線粒體通路，最終導致海馬CAl區(qū)神經(jīng)元凋亡；JNKl/2磷酸化Bad(S128)促進了Bad介導的凋亡，而Aktl磷酸化Bad(S136)