Ryk通過(guò)調(diào)控PCP信號(hào)通路介導(dǎo)神經(jīng)元軸突導(dǎo)向作用.pdf

1、目的：在哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，皮質(zhì)脊髓束是控制機(jī)體自發(fā)性運(yùn)動(dòng)的主要通路。我們前期的研究報(bào)道了Ryk參與介導(dǎo)Wnt5a對(duì)皮質(zhì)脊髓束的排斥性軸突導(dǎo)向作用。近期的研究表明，Ryk通過(guò)與Vangl2進(jìn)行相互作用調(diào)控PCP信號(hào)通路。本研究的目的在于探究Ryk與PCP信號(hào)通路相互溝通的分子機(jī)制，以及進(jìn)一步介導(dǎo)Wnt5a對(duì)皮質(zhì)脊髓束排斥性軸突導(dǎo)向的作用機(jī)理。
　　方法：⑴利用免疫熒光法，檢測(cè)小鼠的皮質(zhì)脊髓束神經(jīng)元及軸突中PCP分子的表達(dá)變化

2、情況。⑵利用干擾慢病毒阻斷PCP分子的表達(dá)，檢測(cè)其對(duì)于生長(zhǎng)錐導(dǎo)向作用以及皮質(zhì)脊髓束投射的影響。⑶.利用免疫熒光法及免疫共沉淀，檢測(cè)Ryk與Vangl2相互作用的情況。⑷利用免疫熒光法及Western blot，檢測(cè)不同Wnt5a蛋白濃度下細(xì)胞各組分中Vangl2的表達(dá)變化情況，以及阻斷Ryk的內(nèi)吞或Ryk與Vangl2的相互作用對(duì)于Vangl2表達(dá)的影響。⑸利用Dunn chamber構(gòu)建Wnt5a蛋白濃度梯度，檢測(cè)Ryk與Vangl2

3、的內(nèi)吞是否對(duì)于生長(zhǎng)錐導(dǎo)向具有調(diào)控作用。⑹利用抑制劑或過(guò)表達(dá)病毒的注射，阻斷Ryk的內(nèi)吞或Ryk與Vangl2的相互作用，檢測(cè)其對(duì)于皮質(zhì)脊髓束投射的影響。
　　結(jié)果：①免疫熒光的結(jié)果顯示，新生小鼠的皮質(zhì)脊髓束神經(jīng)元及軸突中PCP分子的表達(dá)上調(diào)。②干擾慢病毒阻斷PCP分子的表達(dá)后，生長(zhǎng)錐導(dǎo)向作用被抑制，皮質(zhì)脊髓束投射出現(xiàn)紊亂。③免疫熒光和免疫共沉淀結(jié)果顯示，Ryk和Vangl2之間存在相互作用。④免疫熒光和Western blot結(jié)果

4、顯示，高濃度的Wnt5a蛋白作用下Ryk和Vangl2發(fā)生內(nèi)吞，且Ryk的內(nèi)吞和Ryk與Vangl2的相互作用促進(jìn)了Vangl2的內(nèi)吞。⑤在Wnt5a蛋白濃度梯度下，Ryk和Vangl2在高濃度側(cè)發(fā)生內(nèi)吞并且對(duì)于生長(zhǎng)錐導(dǎo)向具有調(diào)控作用。⑥抑制劑或過(guò)表達(dá)病毒阻斷Ryk的內(nèi)吞或Ryk與Vangl2的相互作用后，皮質(zhì)脊髓束投射出現(xiàn)紊亂。
　　結(jié)論：Ryk與PCP信號(hào)通路共同參與了皮質(zhì)脊髓束在脊髓中的軸突導(dǎo)向作用。Ryk通過(guò)與Vangl2