人類胰島microRNA的表達以及miR-148對胰島β細胞增殖和凋亡的調(diào)控作用.pdf

1、微小RNA(microRNA)參與了2型糖尿?。═2D）發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié)，調(diào)節(jié)胰島β細胞功能的microRNA已成為研究T2D的核心領域。發(fā)現(xiàn)人類胰島中microRNA的表達水平，并探討對胰島β細胞發(fā)育和增殖過程中起關鍵作用的microRNA，可以為研究預防、診斷以及治療T2D的新靶點奠定實驗基礎和理論前提。本研究通過灌注消化和連續(xù)梯度離心的方式，分離出人類的原代胰島；提取人類胰島總RNA，利用 Illumina測序技術平臺對人類胰島

2、進行microRNA測序，篩選并分析人類胰島中microRNA的表達譜，采用real-time qPCR芯片技術對測序結果進行驗證；選擇人類胰島中高表達的microRNA—miR-148進行功能分析和機制研究，將miR-148的抑制劑（Anti-miR-148）轉(zhuǎn)染入小鼠胰島打散細胞和胰島β細胞系 MIN6中，觀察Anti-miR-148對胰島β細胞增殖和凋亡的影響；利用real-time qPCR和western-blot技術篩選mi

3、R-148可能作用的靶基因，并用luciferase報告基因的方法檢驗miR-148是否與所篩選靶基因的3’UTR互補結合。研究結果顯示，通過灌注消化和連續(xù)梯度離心的方法可以分離出純度和質(zhì)量都較高的人類原代胰島；對人類胰島進行microRNAs測序分析，發(fā)現(xiàn)了約944種在人類胰島中表達的microRNAs，其中，拷貝數(shù)在400以上的有150余種；測序分析和real-time qPCR芯片驗證結果基本一致；miR-148在人類胰島中具有較

4、高的表達豐度，Anti-miR-148可顯著降低胰島β細胞內(nèi)源性miR-148的表達，與對照組相比較，Anti-miR-148組細胞生長減慢、S期細胞的比例減少，而早期凋亡細胞的比例增加；Real-time qPCR和western-blot結果顯示，Bim，P27和Pten基因在mRNA和蛋白水平的表達均顯著增加；Luciferase報告基因驗證結果顯示，miR-148可以與Bim，P27和Pten基因的3’UTR互補結合。綜上，我們