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1、目的：以核因子κB(NF-κB)p65基因特異的RNA干擾(RNAi)腺病毒表達(dá)載體作為研究工具，初步探討NF-κB信號(hào)通路對(duì)波動(dòng)性高糖(含5.5或30.5 mM D-葡萄糖培養(yǎng)液，每日交替)下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cell，HUVEC)增殖的影響，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)分子bcl-2表達(dá)情況。
方法：利用體外同源重組技術(shù)構(gòu)建NF-κB p65基因特異的siRNA腺
2、病毒表達(dá)載體，在HEK293A細(xì)胞中包裝并擴(kuò)增病毒、空斑實(shí)驗(yàn)法測(cè)定病毒滴度；p65特異的siRNA腺病毒感染HUVEC，同時(shí)予波動(dòng)性高糖干預(yù)，Western印記法測(cè)定p65蛋白表達(dá)和NF-κB核轉(zhuǎn)錄的影響；以AlamarBlue法檢測(cè)細(xì)胞增殖；Western印記法檢測(cè)bcl-2表達(dá)。
結(jié)果：1.成功構(gòu)建了針對(duì)NF-κBp65特異的RNAi腺病毒表達(dá)載體；2.NF-κBp65特異的RNAi腺病毒感染HUVEC后可使p65表達(dá)
3、量明顯下降；3.波動(dòng)性高糖下，RNAi腺病毒感染HUVEC后，亦可檢測(cè)到p65表達(dá)量下降，且隨時(shí)間延長(zhǎng)p65表達(dá)量進(jìn)一步減少，抑制效應(yīng)至少持續(xù)至干預(yù)后第七天；4.NF-κBp65特異腺病毒感染HUVEC，可以明顯抑制波動(dòng)性高糖刺激的NF-κBp65核蛋白轉(zhuǎn)錄，使核內(nèi)p65蛋白表達(dá)處于基礎(chǔ)水平；5.AlamarBlue結(jié)果分析，NF-κBp65特異腺病毒感染HUVEC可以使波動(dòng)性高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖抑制下降(P＜0.01)，但比正常葡萄糖濃
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