正常妊娠母胎界面免疫微環(huán)境的研究.pdf

1、研究背景：妊娠是一個(gè)復(fù)雜而又協(xié)調(diào)的生理過程。從免疫學(xué)的角度看,帶有父方抗原的胎兒及其附屬物作為一種半同種異體抗原組織,將引起母體免疫系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行免疫識(shí)別及應(yīng)答,卻未受到母體的排斥而存活,相反母體與胎兒“和平共處”,這種特殊的狀態(tài)即“母胎耐受”。此種免疫調(diào)節(jié)作用不僅發(fā)生于母體全身免疫系統(tǒng)，而且也發(fā)生在妊娠子宮局部，這種局部免疫因素的調(diào)節(jié)作用更直接地影響著母胎之間的相互作用。而由母體蛻膜組織和胎盤滋養(yǎng)層組織共同構(gòu)成的母-胎界面是妊娠免疫耐受

2、的基礎(chǔ)。母胎界面處滋養(yǎng)細(xì)胞、免疫活性細(xì)胞及細(xì)胞因子形成母胎界面免疫微環(huán)境,為免疫耐受的形成和維持起了關(guān)鍵作用。在妊娠的不同時(shí)期，母胎界面免疫微環(huán)境表現(xiàn)為動(dòng)態(tài)的平衡，在早期以及中期妊娠時(shí)，其局部的免疫微環(huán)境有利于妊娠的建立、維持以及胎兒的生長發(fā)育，至妊娠晚期，其局部的免疫微環(huán)境逐漸變化為分娩的發(fā)動(dòng)作內(nèi)源性準(zhǔn)備。如果母胎界面免疫微環(huán)境改變導(dǎo)致這種免疫耐受機(jī)制失衡,將產(chǎn)生一系列的妊娠疾病及并發(fā)癥如反復(fù)自發(fā)性流產(chǎn)、死胎、妊娠高血壓綜合征等病理妊

3、娠情況。對(duì)上述問題的進(jìn)一步闡明，將有助于理解生理妊娠,將為最終解決反復(fù)自發(fā)性流產(chǎn)、死胎、妊娠高血壓綜合征等病理妊娠問題提供理論依據(jù)。
　　 目的：檢測(cè)正常妊娠孕婦早、晚及分娩期外周血、蛻膜中NK細(xì)胞在含量、表型方面上的變化，檢測(cè)正常妊娠孕婦早、晚及分娩期外周血、蛻膜中CD4+CD25+T細(xì)胞的比例變化，檢測(cè)正常妊娠孕婦早、晚及分娩期外周血、蛻膜中NK細(xì)胞胞內(nèi)Th1/Th2型細(xì)胞因子的變化，探討母胎界面免疫耐受形成與維持的可能機(jī)制

4、。
　　 方法：⑴收取正常妊娠早期、晚期、分娩期孕婦外周血各16例，密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)妊娠各期外周血中NK細(xì)胞的含量、表型及CD4+CD25+T細(xì)胞的比例變化。⑵收取正常妊娠早期、晚期、分娩期孕婦蛻膜組織各16例，機(jī)械研磨法聯(lián)合密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)妊娠各期蛻膜中NK細(xì)胞的含量、表型及CD4+CD25+T細(xì)胞的比例變化。⑶流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)正常妊娠早期、晚期、分娩期外周血及蛻膜中NK細(xì)

5、胞胞內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①外周血中的NK細(xì)胞是以CD56+CD16+為主，分娩期孕婦與妊娠早期孕婦和妊娠晚期孕婦相比，其外周血中CD3-CD56+細(xì)胞、CD56+CD16-細(xì)胞、CD56+CD16+細(xì)胞的百分含量均明顯升高（Ｐ均＜0.05）；而妊娠早期孕婦與妊娠晚期孕婦相比，其外周血中CD3-CD56+細(xì)胞、CD56+CD16-細(xì)胞、CD56+CD16+細(xì)胞含量均無顯著變化（Ｐ＞0.05）；妊娠各

6、期的CD56+CD16+/CD3-CD56+均無顯著變化（Ｐ＞0.05）。②蛻膜中的NK細(xì)胞是以CD56+CD16-為主，妊娠早期孕婦和分娩期孕婦與妊娠晚期孕婦相比，其蛻膜中CD3-CD56+細(xì)胞、CD56+CD16-細(xì)胞的百分含量均明顯升高（Ｐ均＜0.05）；而分娩期孕婦的CD56+CD16+細(xì)胞、CD56+CD16+/CD3-CD56+與妊娠早期孕婦和妊娠晚期孕婦相比明顯升高（Ｐ均＜0.05），但妊娠早期與妊娠晚期的CD56+CD1

7、6+細(xì)胞含量無顯著變化（Ｐ＞0.05）。③流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組外周血及蛻膜中CD4+CD25+T細(xì)胞的比例變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常妊娠過程中孕婦外周血中CD4+CD25+T細(xì)胞比例變化:妊娠早期較高(5.46±0.93),明顯高于妊娠晚期(3.56±0.44)及分娩期(1.93±0.52)，分娩期最低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而正常妊娠過程中孕婦蛻膜中CD4+CD25+T細(xì)胞比例變化不同于外周血：妊娠早期(3.15±0.64) 及妊

8、娠晚期(2.92±0.62)高于分娩期(1.77±0.34)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但妊娠早期與妊娠晚期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05)。④流式細(xì)胞術(shù)對(duì)各組外周血中CD3-CD56+細(xì)胞群進(jìn)行二次設(shè)門，檢測(cè)其胞內(nèi)IFN-γ、IL-4的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常妊娠過程中孕婦外周血NK細(xì)胞胞內(nèi)IFN-γ的表達(dá)率為分娩期最高,明顯高于妊娠早期及妊娠晚期，妊娠早期最低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而IL-4的表達(dá)率正好相反為妊

9、娠早期最高，明顯高于妊娠晚期及分娩期，分娩期最低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。⑤流式細(xì)胞術(shù)對(duì)各組蛻膜中CD3-CD56+細(xì)胞群進(jìn)行二次設(shè)門，檢測(cè)其胞內(nèi)IFN-γ、IL-4的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常妊娠過程中孕婦蛻膜NK細(xì)胞胞內(nèi)IFN-γ的表達(dá)率為分娩期最高,明顯高于妊娠早期及妊娠晚期，妊娠早期最低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而IL-4的表達(dá)率為妊娠早期及妊娠晚期高于分娩期，分娩期最低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而妊