女性SLE患者雌激素受體α基因多態(tài)性與Th1-Th2細胞因子漂移的相關性研究.pdf

1、一、目的 通過對女性SLE患者進行ERα基因多態(tài)性，Th1/Th2細胞因子mRNA的檢測，以及對它們之間相關性的研究，進一步探討女性SLE患者的發(fā)病機制，為SLE的預防和治療提供新的思路。 二、方法 提取SLE患者基因組DNA，PCR擴增ERα基因片段，分別取PCR擴增產(chǎn)物用XbaⅠ和PvuⅡ酶切、電泳，紫外檢測儀觀察結(jié)果，XbaⅠ酶切后可分為3種基因型：缺乏XbaⅠ酶切位點為XX型，雜合予為Xx型，存在XbaⅠ

2、酶切位點為xx型；PvuⅡ酶切后可分為3種基因型：缺乏PvuⅡ酶切位點為PP型，雜合了為Pp型，存在PvuⅡ酶切位點為pp型。用淋巴細胞分層液密度梯度離心法常規(guī)分離外周血單個核細胞（PBMC）。TRIZOL法提取細胞總RNA，cDNA合成按照逆轉(zhuǎn)錄酶（promege產(chǎn)品）說明書操作合成。應用Primer3軟件在線設計引物，以β-actin為內(nèi)參照，RT-PCR擴增IL-10、IL-4和IFN-γ、IL-2 mRNA。通過瓊脂糖凝膠電泳后

3、，用TANOIN凝膠掃描儀，以Tanon Gis軟件對電泳條帶進行灰度掃描，并計算各細胞因子與β-actin的比值，從而得出各細胞因子mRNA的相對含量，并利用統(tǒng)計學方法得出ERα基因多態(tài)性與各細胞因子mRNA的關系。 三、結(jié)果 1．SLE患者與健康對照組ERα基因XbaⅠ和PvuⅡ酶切位點多態(tài)性之間差異無統(tǒng)計學意義； 2．PpXx基因SLE患者IL-10和IL-4的表達比健康對照組升高，在SLE患者組各基因型之

4、間，PpXx基因型IL-10表達比PPXX、PPXx、PpXx和ppxx基因型明顯升高，在PpXx基因型IL-4的表達比PPXX、Ppxx和ppxx基因型表達升高； 3．Ppxx基因型SLE患者IFN-γ、IL-2表達比健康對照組降低，在SLE患者組各基因型之間，Ppxx基因型IFN-γ的表達比PpXx和ppxx明顯降低，Ppxx基因型IL-2比PPXX、PpXx和ppxx基因型表達降低； 4．在健康對照組各基因型之間，