疲勞型亞健康小鼠模型的創(chuàng)建及維康顆粒對其血清皮質(zhì)酮的影響.pdf

1、[研究背景]
　　 亞健康狀態(tài)是指機體雖沒有明確的疾病診斷,卻呈現(xiàn)出一系列的功能性改變,從而體現(xiàn)在身心情感等方面處于健康與疾病之間的健康低質(zhì)量狀態(tài),常以一多三少(一多指疲勞多；三少即三種減退:活力減退、反應(yīng)能力減退和適應(yīng)能力減退)為主要表現(xiàn)。廣州(本課題組)、北京等相關(guān)單位的亞健康流行病學(xué)調(diào)查研究表明:亞健康人群發(fā)生率為60％～70％,并呈現(xiàn)以下幾個方面的特點:(1)具有普遍性；(2)具有不易被個人所意識的隱匿性和潛伏性；(3)

2、具有不為醫(yī)學(xué)所確認的客觀性和明確性；(4)具有向多種慢性疾病發(fā)展的趨向性和向健康逆轉(zhuǎn)的可逆性。亞健康的臨床表現(xiàn)多種多樣,而通過本課題組的大規(guī)模亞健康流行病學(xué)調(diào)查研究表明,其中疲勞不僅是亞健康狀態(tài)的重要臨床表現(xiàn)之一,也是導(dǎo)致亞健康發(fā)生發(fā)展的重要因為,疲勞型亞健康是亞健康的主要類型之一。疲勞型亞健康狀態(tài)的發(fā)生可能與日益加快的生活、工作節(jié)奏,不斷加重的心理及社會壓力,缺乏規(guī)律的飲食,長期睡眠不足等因素有關(guān),至于這些相關(guān)因素通過何種途徑導(dǎo)致疲勞

3、型亞健康狀態(tài)的發(fā)生至今尚不清楚。如果將疲勞型亞健康相關(guān)發(fā)生因素分類的話,過度疲勞、長期壓力、憤怒、憂郁、睡眠障礙等可歸納為軀體或心理應(yīng)激的范疇。應(yīng)激是指機體在受到應(yīng)激原的刺激時所出現(xiàn)的非特異性全身反應(yīng),主要表現(xiàn)在通過釋放一系列激素和神經(jīng)遞質(zhì)來提高機體基礎(chǔ)代謝水平,使機體處于最佳動員狀態(tài),以克服應(yīng)激原對機體的損害,其中腎上腺皮質(zhì)興奮性增強,糖皮質(zhì)激素分泌增加,在應(yīng)激發(fā)生時起著非常重要的作用。然而如果劣性應(yīng)激原持續(xù)作用于機體,則應(yīng)激可表現(xiàn)為

4、一個動態(tài)的連續(xù)過程,并由相應(yīng)激素的靶效應(yīng)最終導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境紊亂和疾病發(fā)生。過度疲勞、長期壓力、睡眠障礙等應(yīng)激正是這樣一種持續(xù)存在的劣性應(yīng)激源,長期作用于機體將導(dǎo)致“健康-亞健康-疾病”的動態(tài)發(fā)展,亞健康是介于健康與疾病之間的一種中間狀態(tài),與其上游的健康和下游的疾病之間存在移行變化,這種移行變化是雙向的,形成健康-亞健康-疾病的動態(tài)變化過程,因此早期干預(yù)以促進其向健康恢復(fù)及阻止其向疾病發(fā)展顯得尤為重要。由于亞健康發(fā)病機制的不明確使得目前尚缺乏

5、有效的西醫(yī)治療手段,維康顆粒針對亞健康發(fā)生因素,以調(diào)節(jié)臟腑陰陽、氣血為目的研制而成,據(jù)臨床觀察表明維康顆粒對于患者的疲勞型亞健康狀態(tài)具有良好的改善作用。為深入研究疲勞型亞健康的發(fā)生發(fā)展機制,因此需要引進疲勞型亞健康模型以克服人體試驗的局限性,然而目前尚沒有相關(guān)動物模型。故本課題意在通過建立疲勞型亞健康小鼠模型,探討慢性疲勞應(yīng)激下疲勞型亞健康發(fā)生發(fā)展機制以及維康顆粒干預(yù)疲勞型亞健康防止其向疾病發(fā)展的機制。本課題將分兩部分進行:
　　

6、 第一部分:疲勞型亞健康小鼠模型的建立
　　 第二部分:維康顆粒對疲勞型亞健康小鼠血清皮質(zhì)酮的影響
　　 [目的]
　　 第一部分:模擬疲勞型亞健康主要發(fā)生因素,建立疲勞型亞健康小鼠模型,根據(jù)小鼠精神行為、疲勞測定、病理、生化、血常規(guī)等指標和血清皮質(zhì)酮水平對疲勞型亞健康小鼠模型進行界定和優(yōu)效性評價。
　　 第二部分:觀察維康顆粒在血清皮質(zhì)酮水平對疲勞型亞健康的干預(yù)作用,為研究維康顆粒干預(yù)疲勞型亞健康的靶

7、向治療機理奠定前期基礎(chǔ)。
　　 [方法]
　　 第一部分:模型組參照本課題組方法(疲勞型亞健康大鼠模型)并加以改進,將各組小鼠置于水深為0.8cm、大小為29cmx18cmx15cm的塑料盒內(nèi),每盒5只,來模擬過度疲勞、擁擠、睡眠不足、恐懼、焦慮等應(yīng)激因素以造成小鼠亞健康疲勞狀態(tài)。正常對照組不給予任何刺激,自由飲食。測定負7％體重力竭游泳時間(水溫25℃；負重:用橡皮筋將7％自身重量的鉛墜系于小鼠尾部；力竭游泳標準:小鼠

8、鼻尖沉入水下10s),以評估小鼠疲勞程度。
　　 實驗一:確定造模強度
　　 SPF級健康雄性KM小鼠40只,完全隨機分為:正常對照組、造模6h組、造模8h組、造模10h組,每組10只,持續(xù)造模21天,每3天測定一次力竭游泳時間以評估疲勞程度。
　　 實驗二:確定造模時間
　　 SPF級健康雄性KM小鼠150只,完全隨機分為:(1)正常對照:0天組、5天組、9天組、12天組、16天組；(2)造模:0天組、

9、5天組、9天組、12天組、16天組；(3)生化血常規(guī)檢測:正常對照組、造模5天組、造模9天組、造模12天組、造模16天組,每組10只。將造模各組小鼠置于塑料盒內(nèi)8h/天,每盒5只,分別持續(xù)0、5、9、12、16天造模。各組小鼠于造模結(jié)束前負7％體重力竭游泳一次以評估疲勞程度。放射免疫法檢測血清皮質(zhì)酮含量。
　　 實驗三:模型的評價
　　 SPF級健康雄性KM小鼠40只,完全隨機分為:正常對照組、疲勞型亞健康模型組(造模9

10、天/每天8h)、自然恢復(fù)7天組(造模9天后恢復(fù)7天)、自然恢復(fù)14天組(造模9天后恢復(fù)14天),每組10只。各組小鼠于造模結(jié)束前負7％體重力竭游泳一次以評估疲勞程度。放射免疫法檢測血清皮質(zhì)酮含量。
　　 第二部分:疲勞型亞健康模型組小鼠,造模9天后立即處死取材:模型恢復(fù)組,造模9天后生理鹽水灌胃7天。維康高、中、低劑量組分別于造模9天后給予高、中、低劑量的維康顆粒水溶液灌胃7天。正常對照組正常飲食。
　　 實驗四:SPF

11、級健康雄性KM小鼠60只,完全隨機分為:正常對照組,疲勞型亞健康模型組、模型恢復(fù)組、維康高劑量組、維康中劑量組、維康低劑量組,每組10只。各組小鼠于造模結(jié)束前負7％體重力竭游泳一次以評估疲勞程度。放射免疫法檢測血清皮質(zhì)酮含量。
　　 [結(jié)果]
　　 實驗一:隨著造模時間的延長:(1)造模6h組小鼠力竭游泳時間緩慢減少,第12天出現(xiàn)顯著性差異(P<0.01)。(2)造模8h組小鼠力竭游泳時間顯著減少,第3天出現(xiàn)顯著性差異(

12、P<0.05),6至12天下降明顯。(3)造模10h組力竭游泳時間急劇減少,第3天出現(xiàn)顯著性差異(P<0.01)。
　　 實驗二:隨著實驗天數(shù)延長:(1)正常對照組小鼠體重顯著增加(P<0.05),模型組無顯著性差異(P>0.05)。(2)正常對照組小鼠力竭游泳時間無顯著性差異(P>0.05),模型組小鼠力竭游泳時間逐漸減少,5天組出現(xiàn)顯著性差異(P<0.01)。(3)正常對照組小鼠血清皮質(zhì)酮無顯著性差異(P>0.05),模型組

13、小鼠血清皮質(zhì)酮在第9天前無顯著性差異(P>0.05),第9天時出現(xiàn)顯著性升高(P<0.05)。(4)造模9天時,小鼠血清生化、血常規(guī)與正常對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)。
　　 實驗三:與正常對照組比較:(1)疲勞型亞健康模型組游泳時間和血清皮質(zhì)酮有顯著差異(P<0.05)。(2)恢復(fù)7天組游泳時間有顯著性差異(P<0.05),而血清皮質(zhì)酮無顯著性差異(P>0.05)。(3)恢復(fù)14天組游泳時間和血清皮質(zhì)酮均無顯著差異

14、(P>0.05)。(4)恢復(fù)14天與恢復(fù)7天比較,游泳時間顯著增加(P<0.05),血清皮質(zhì)酮顯著降低(P<0.05)。
　　 實驗四:與正常對照組比較:疲勞型亞健康模型組和模型恢復(fù)組力竭游泳時間顯著降低(P<0.05),血清皮質(zhì)酮顯著增加(P<0.05),維康高劑量組和維康中劑量組游泳時間和血皮質(zhì)酮均無顯著性差異(P>0.05),維康低劑量組游泳時間顯著性降低(P<0.05),血清皮質(zhì)酮顯著增加(P<0.05)。
　　

15、 [結(jié)論]
　　 1.本研究通過模擬疲勞型亞健康相關(guān)發(fā)生因素,強迫小鼠每天在水盒中站立8h,連續(xù)造模9d,成功制備出疲勞型亞健康小鼠模型。
　　 2.去除疲勞型亞健康發(fā)病因素,亞健康狀態(tài)能自行康復(fù),但需時間較長,而應(yīng)用維康顆粒干預(yù)治療,可明顯改善小鼠疲勞狀態(tài),顯著提高疲勞型亞健康小鼠力竭游泳時間,阻斷向疾病的發(fā)展,縮短亞健康康復(fù)時間。
　　 3.過度疲勞、睡眠障礙、心理應(yīng)激等慢性應(yīng)激因素持續(xù)作用引起的腎上腺皮質(zhì)功