miR-21在脂多糖誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞中的動態(tài)表達(dá)及其與TNF-α的相關(guān)性分析.pdf

1、目的：觀察在脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的NR8383肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中miR-21及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的動態(tài)表達(dá)情況，分析它們的表達(dá)變化相關(guān)性，探討miR-21在肺泡巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)中的作用。
　　方法：按1×106個/mL把體外培養(yǎng)的肺泡巨噬細(xì)胞接種于六孔板，90min貼壁后加入終濃度1μg/mL的脂多糖，在刺激之后的0h、3h、6h、12h時間點離心后分別收集培養(yǎng)上清液與細(xì)胞團塊。Western Blot檢測細(xì)胞核中

2、NF-κB p65蛋白表達(dá)，實時熒光定量PCR(RT-qPCR)測定細(xì)胞中TNF-α mRNA與miR-21的表達(dá)情況，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定上清液中TNF-α蛋白表達(dá)水平。雙變量相關(guān)性分析法分析miR-21和TNF-α mRNA的相關(guān)性。
　　結(jié)果：⑴NR8383肺泡巨噬細(xì)胞中的TNF-α mRNA表達(dá)在脂多糖刺激細(xì)胞3h后達(dá)到頂峰（61.57±11.42倍，P＜0.01），6h下降至27.72±5.16倍(P＜0.0

3、5)，12h時為12.02±2.61倍(P＜0.01);培養(yǎng)上清液中的TNF-α蛋白在脂多糖刺激3h后出現(xiàn)升高（367.98±45.23pg/mL，P＜0.01），6h繼續(xù)升高(591.73±48.18pg/mL)，12h到達(dá)表達(dá)高峰（769.92±57.73pg/mL，P＜0.01）。⑵脂多糖刺激NR8383肺泡巨噬細(xì)胞后，細(xì)胞中的miR-21表達(dá)水平逐漸增高;3h與0h miR-21表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義、6h（3.27±0.54倍

4、P＜0.01）和12h（6.28±0.95倍P＜0.01）miR-21的表達(dá)量逐漸升高。⑶脂多糖刺激NR8383肺泡巨噬細(xì)胞后誘導(dǎo)NF-κB活化，在3h、6h、12h時間點細(xì)胞核中NF-κB p65蛋白較0h組均表達(dá)上調(diào)。⑷NR8383肺泡巨噬細(xì)胞中miR-21的表達(dá)水平與TNF-α mRNA的含量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.895，P＜0.01)。
　　結(jié)論：脂多糖刺激NR8383肺泡巨噬細(xì)胞后，miR-21表達(dá)逐漸上調(diào)而TNF-αmR