金釵石斛多糖對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、NO的影響.pdf

1、目的：研究金釵石斛多糖對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)的影響，為進一步研究金釵石斛多糖的藥理作用提供實驗依據(jù)。 方法：采用水提醇沉法提取金釵石斛多糖，用化學(xué)的方法判定多糖的性質(zhì)，紅外光譜法鑒定該多糖的結(jié)構(gòu)特征，紫外分光光度法進行初步純度判定，苯酚-硫酸法進行含量測定。體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，分為：正常對照組，LPS組(10μg/mL LPS)，金釵石斛多糖實驗組，后者

2、先用50～400mg/L濃度的金釵石斛多糖與巨噬細(xì)胞溫孵1h后，再加入10μg/mL LPS共同培養(yǎng)，以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的活化。采用放射免疫法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α的含量，硝酸酶還原法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中NO的含量，分析其時間-劑量-效應(yīng)關(guān)系。同時采用熒光法測定細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的活性，實時PCR(real-time PCR)法測定TNF-α mRNA、iNOSmRNA的表達。 結(jié)果：①提取的金釵石斛多糖經(jīng)理化性質(zhì)

3、分析，表現(xiàn)出多糖的特性，紅外光譜分析具有典型多糖特征吸收峰，紫外光譜200 nm處有最大吸收峰，在260 nm～280 nm間無明顯吸收峰，說明蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸較少。苯酚-硫酸法測得金釵石斛多糖相對含量為79.35％0②LPS組與100mg/L的金釵石斛多糖的實驗組TNF-α的分泌均在2h達峰值，隨后下降，8h后恢復(fù)至正常水平；隨著時間延長臣噬細(xì)胞釋放NO逐漸增多，24h達頂峰，持續(xù)至48h。100mg/L的金釵石斛多糖實驗紐巨噬細(xì)

4、胞TNF-α、NO分泌均低于LPS組。③LPS組與正常對照組比較，TNF-α、NO分泌增加(P<0.01)，iNOS活性升高(P<0.01)；TNF-αmRNA、iNOSmRNA的表達增高(P<0.01)。4組不同濃度(50～400 mg/L)金釵石斛多糖實驗組與LPS組比較，TNF-α、NO分泌減少(P<0.05)，iNOS活力降低(P<0.01)，TNF-α mRNA、iNOS mRNA表達下降(P<0.05)。各實驗組之間，金釵石