2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、海水淹溺(Sea water drowning)不僅常發(fā)生于航海事故、海上作業(yè)、海上旅行等,而且是軍隊海上訓練和作戰(zhàn)減員的重要原因[1]。海水淹溺可導致急性肺損傷(acute lung injury,ALI),嚴重者可發(fā)展為海水型呼吸窘迫綜合征(sea water respiratory distress syndrome,SW-RDS),病情嚴重,救治極為困難[2]。因此,研究海水型ALI的早期救治,并防止其向SW-RDS轉化,具有重

2、要的意義。有學者報道地塞米松可以減輕海水淹溺后急性肺損傷,但具體機制尚不明確[3-4]。普遍認為TNF-α是導致ALI/ARDS的啟動因子[5-7],而海水淹溺后TNF-αmRNA的動態(tài)表達及地塞米松對海水淹溺后巨噬細胞內TNF-α分子表達的影響尚未報道。本研究試圖闡明TNF-α在SW-RDS發(fā)病機制中的作用,探索地塞米松對海水型ALI的治療機制。
  目的:通過向兔氣管內灌注海水,模擬海水淹溺后導致ALI生理過程,在灌注后不同時

3、點觀察AM內TNF-αmRNA的動態(tài)表達,并應用地塞米松(Dexamethasone,Dex)進行干預,探討地塞米松對海水淹溺急性肺損傷的治療作用及相應的機制。
  方法:
  1.實驗分組:
  健康新西蘭大耳兔40只(第四軍醫(yī)大學動物實驗中心提供),體重(2.50±0.36)kg。為觀察海水淹溺后肺泡巨噬細胞(AM)內TNF-αmRNA的動態(tài)表達,25只兔隨機分成5組:海水淹溺后0min(正常對照組)、30、60、

4、90、120min時點組;為了解地塞米松對海水淹溺后AM內TNF-αmRNA表達的影響,15只兔隨機分為3組(每組5只):①對照組(Control group,C組):僅作氣管插管,不作其他處理;②海水淹溺組(Model group,M組):制備動物模型,以等量生理鹽水代替地塞米松靜脈注射。③地塞米松治療組(Treatment group,T組):模型建立后立即靜脈注射地塞米松2mg/kg,隨即以(1mg·kg-1·h-1)靜脈維持。<

5、br>  2.建立海水淹溺家兔急性肺損傷模型
  3.動脈血氣分析各組均于手術或模型建立后0min、30min、60min、90min、120min經左側股內動脈采集0.5ml動脈血注入抗凝試管用于動脈血氣分析,采血0.6ml,血氣分析由第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院血氣/肺功能室測定。
  4.支氣管肺泡灌洗液(BALF)的采集:25只時點組兔于上述各時點放血處死,C組、M組、T組于100分鐘放血處死,隨后開胸、夾閉氣管取全肺。左側

6、肺葉作肺泡灌洗:生理鹽水以5ml/次,共10ml,回收率70%左右。
  5.肺組織的離體觀察
  分別于致傷后0min、30min、60min、90min、120min分批處死家兔,取肺組織,觀察肺臟的肉眼變化,并使用數碼相機拍照記錄。肺組織含水量測定:采用干濕重稱重法測定::取得右肺上、中葉,稱取肺濕重(W),而后置于100℃恒溫烤箱內48h至重量恒定后稱肺干重(D),肺含水量=(肺濕重-肺干重)/肺干重。取左肺下葉組織

7、稱重標記,冷凍保存于-70℃環(huán)境。測量腫瘤壞死因子a(TNF-a)、IL-10的含量。各組于右下葉同等部位取0.5g肺組織置于10%福爾馬林溶液中,固定組織塊,經石蠟包埋切片,HE染色后,觀察組織病理學改變。
  6.肺泡巨噬細胞的分離和培養(yǎng)
  將支氣管肺泡灌洗液1000r/min離心10min,沉淀用D-Hank液洗滌,以RPMI-1640懸浮后,置25mL玻璃細胞培養(yǎng)瓶中,于37℃、5%二氧化碳、PH7.2條件下培養(yǎng)4

8、小時,等AM黏附于玻璃表面,再用培養(yǎng)液沖洗掉未黏附的中性粒細胞和淋巴細胞等,分離純化的AM以瑞氏染色證實為巨噬細胞,純度>95%,臺盼藍染色鑒定細胞活力>90%。
  7.逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測兔肺泡巨噬細胞內TNF-amRNA表達
  結果:
  (1)血氣分析結果顯示,PE-SWD模型建立后,60min時,PaO2降低到到最低點(31.6±4.98mmHg,1mmHg=0.133kPa)后逐漸升高,

9、到120分鐘再次降低;PCO2在30min升至最高點,后逐漸回復,可能與家兔代償性過度通氣有關;PH值和D/W在模型建立后進行性下降。
  (2)病理學檢查結果顯示:大體標本可見海水淹溺后雙肺表面散在暗紅色片狀區(qū)及點狀出血區(qū),以雙下肺背側為主,呈“紅色肝樣變”,肺組織切面及氣管腔內有中量血性粉紅色泡沫樣液體滲出。以地塞米松治療后的T組亦可見基本相同的肺損傷區(qū)域,但總體顏色較淡。HE染色(×100倍)下,M組可見肺泡及肺間質水腫明顯

10、,肺出血、肺泡隔斷裂,肺泡腔及微血管中大量炎癥細胞(主要為中性粒細胞)浸潤,肺損傷程度嚴重;而T組肺泡擴張、水腫明顯,肺泡腔及間質內炎癥細胞浸潤較輕,肺損傷程度較M組減輕。
  (3)RT-PCR方法檢測海水淹溺后家兔AM內TNF-αmRNA的表達即開始上升,隨時間增加逐漸增高.90分鐘左右達到高峰,之后輕微下降,但仍明顯高于正常對照組(P<0.01)。C組AM中TNF-αmRNA僅有輕微表達,M組顯著升高(P<0.01):T組顯

11、著低于M組(P<0.05)。
  結論:
  1.本實驗結果表明兔PO2、PH進行性下降,提示肺換氣功能受損嚴重,符合ALI/ARDS診斷標準,表明海水淹溺致急性肺損傷兔模型構建成功。
  2.SW-RDS家兔肺泡巨噬細胞中TNF-amRNA的表達水平在模型建立后即開始升高(P<0.01),說明SW-RDS原因可能與肺泡巨噬細胞內TNF-αmRNA高表達有關;對SW-RDS動物模型AM中TNF-αmRNA的動態(tài)分析,提

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