白藜蘆醇對脂多糖誘導(dǎo)的肺泡巨噬細(xì)胞微小RNA-146a表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察白藜蘆醇對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞微小RNA-146a(miR-146a)表達(dá)的影響，探討白藜蘆醇對肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用及其機制，為臨床治療膿毒癥肺損傷提供新的治療途徑。
　　 方法：
　　 將體外培養(yǎng)的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(NR8383)按2×106個/孔接種于六孔板，細(xì)胞貼壁90min，分為磷酸鹽緩沖液(PBS)對照組、終濃度1μg/ml LPS處理組、1μg/ml白藜蘆醇預(yù)處

2、理30min+終濃度1μg/ml LPS處理組、10μg/ml白藜蘆醇預(yù)處理30min+終濃度1μg/ml LPS處理組，細(xì)胞培養(yǎng)6h后，觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，并收集細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)上清液，采用實時熒光定量PCR檢測細(xì)胞中TNF-αmRNA和miR-146a的表達(dá)變化，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.LPS刺激NR8383細(xì)胞6h后，細(xì)胞生長緩慢、

3、貼壁能力減弱、部分細(xì)胞死亡，白藜蘆醇預(yù)處理細(xì)胞后，能減輕LPS對細(xì)胞的損傷作用、維持細(xì)胞的貼壁、促進(jìn)細(xì)胞生長，并且對細(xì)胞的保護(hù)作用呈藥物劑量依賴性；
　　 2.LPS刺激NR8383細(xì)胞6h后，相對于PBS對照組，LPS處理組細(xì)胞中TNF-α mRNA的表達(dá)量升高了50.05±8.08倍(P<0.01)，培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白從26.15±13.43pg/ml上升到644.2±36.82pg/ml(P<0.01)、白藜蘆醇預(yù)

4、處理組(1μg/ml和10μg/ml)細(xì)胞中TNF-α mRNA的表達(dá)量分別升高了29.64±8.39倍(P<0.01)和13.54±4.50倍(P<0.01)，培養(yǎng)上清液中TNF-α蛋白分別上升到447.7±41.48pg/ml(P<0.01)和345.0±42.54pg/ml(P<0.01)；
　　 3.LPS刺激NR8383細(xì)胞6h后，相對于PBS對照組，LPS處理組細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)升高了5.92±1.57(P

5、<0.01)，白藜蘆醇預(yù)處理組(1μg/ml和10μg/m1)細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)分別升高了8.67±1.18倍(P<0.01)和11.17±1.40倍(P<0.01)；
　　 結(jié)論：
　　 白藜蘆醇預(yù)處理NR8383細(xì)胞后，能減輕LPS對細(xì)胞的損傷作用，抑制細(xì)胞釋放炎癥因子TNF-α，并上調(diào)細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)。因此，我們推測在肺泡巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中，白藜蘆醇可能通過上調(diào)miR-146a的表達(dá)，來負(fù)性調(diào)