基于cDNA-AFLP分析茶樹噴施化學殺蟲劑前后的基因表達譜差異.pdf

1、化學防治是茶園管理中不可或缺的手段之一，但是在人們受益的同時，其對茶樹體內(nèi)的生理生化反應(yīng)和自身對病、蟲害防御體系是否產(chǎn)生負面影響值得關(guān)注。論文基于cDNA-AFLP技術(shù)，研究茶樹被噴施目前茶園常用化學殺蟲劑吡蟲啉前后的基因表達譜差異，并對差異表達基因進行生物信息學分析和qRT-PCR驗證。主要結(jié)果如下：
　　 (1)利用內(nèi)切酶分析軟件，對GenBank中登錄的有關(guān)茶樹基因的cDNA全長序列和EST進行酶切分析，結(jié)果表明ApoI/

2、MseI是利用cDNA-AFLP技術(shù)對茶樹進行差異表達譜分析的最佳酶切組合。
　　 (2)以優(yōu)化后的cDNA-AFLP技術(shù)分析茶樹噴施吡蟲啉（出廠推薦使用濃度）前后的基因表達譜差異，結(jié)果總共獲得了220條差異表達片段(TDF)，經(jīng)回收、克隆和測序得到160條，其中誘導表達的有94條，抑制下調(diào)的有66條。差異條帶長度總體分布在113-822 bp之間，其中大部分條帶長度集中在200-300bp和300-400 bp之間，分別占總數(shù)

3、的3g％與30％，而且還有一些片段長度大于500 bp。
　　 (3)利用BLAST進行同源性比對分析發(fā)現(xiàn)，160條TDF中有8條的比對結(jié)果出現(xiàn)重復，余下的152條中有26條功能尚不清楚，18條為沒有參比序列相匹配的新序列；對剩下的108個與已知功能基因相關(guān)的TDF序列進行功能預測，結(jié)果表明這些條帶可以分別歸屬于信號傳導、光合與能量代謝、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、抗病與抗逆蛋白、跨膜運輸、應(yīng)激反應(yīng)和物質(zhì)代謝等7個功能類型。其中，對于誘導上調(diào)和抑

4、制下調(diào)的TDF來說，其分屬的功能類型共同特點是二者中與光合與能量代謝，以及物質(zhì)代謝相關(guān)的基因所占比例最高，分別占各自總數(shù)的41％與36％;而二者間不同之處是，前者與轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能相關(guān)的基因所占比例明顯少于后者，分別占各自總數(shù)的9％和16％;二者與其它功能類型的基因所占各自總數(shù)的比例差別不大。
　　 (4)為了驗證差異條帶的正確性和吡蟲啉對茶樹基因表達影響特點，分別選擇了2條誘導上調(diào)TDF(17N3、26P5)和4條抑制下調(diào)TDF(