不同兒茶素含量茶樹愈傷組織差異表達基因的cDNA-AFLP分析.pdf

1、兒茶素類是茶葉最重要的特征代謝成分,也是構(gòu)成茶葉品質(zhì)的主要化學(xué)成分。研究兒茶素類生物合成途徑中的基因表達,對改良茶樹品種、提高茶葉品質(zhì)具有重要的應(yīng)用價值。
　　 本文利用cDNA-AFLP技術(shù),建立了不同兒茶素含量的愈傷組織(“云莖63X”和“云莖63Y”)的cDNA-AFLP文庫;分析了供試材料間基因的差異顯示;利用實時熒光定量PCR技術(shù),分析了兒茶素合成相關(guān)基因的表達差異;利用RACE技術(shù)克隆了一個可能與細胞生長發(fā)育有關(guān)的茶

2、樹MYB基因。主要結(jié)論如下:
　　 從形態(tài)和生長發(fā)育上看,“云莖63Y”顏色發(fā)黃、質(zhì)地略硬、生長較快,而“云莖63X”顏色發(fā)白、質(zhì)地松散、生長較慢;HPLC檢測結(jié)果顯示,兩種愈傷組織中兒茶素單體組成差異不大,均含有C、EC、EGC、EGCG、ECG這五種兒茶素,但“云莖63Y”中各單體兒茶素含量和兒茶素總量均高于“云莖63X”。
　　 利用cDNA-AFLP技術(shù),對兩種愈傷組織間的基因表達差異進行分析,共篩選出60條長度

3、在110-1000bp之間的有效差異條帶。其中19條在“云莖63X”中高表達,41條在“云莖63Y”中高表達。經(jīng)b1ast分析,按功能不同,表達序列標簽(ESTs)可分為七類,其中與苯丙烷代謝相關(guān)(2條)、與依賴UDPG的轉(zhuǎn)移酶相關(guān)(5條)、與轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子相關(guān)(8條)、與物質(zhì)運輸相關(guān)(7條)、與信號傳導(dǎo)相關(guān)(10條)、與其他代謝相關(guān)(17條)及功能尚不清楚(11條)。
　　 以愈傷組織和茶鮮葉為材料,利用熒光定量PCR技術(shù),分析

4、了cDNA-AFLP文庫中主要預(yù)測基因(咖啡酸O-轉(zhuǎn)甲基酶、苯丙氨酸解氨酶、UDPG:花青素3'-O型葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶、CsMYB1轉(zhuǎn)錄因子、CsMYB2轉(zhuǎn)錄因子、WD40重復(fù)蛋白、2,4-D可誘導(dǎo)的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶)和兒茶素生物合成相關(guān)基因(PAL,F3H,DFR,LAR,ANS和ANR)的表達差異。結(jié)果顯示,這些基因均在“云莖63Y”中高表達;隨著鮮葉成熟度的變化,這些基因的表達規(guī)律并不相同。
　　 利用RACE技術(shù)擴增了