腫瘤壞死因子α在大鼠急性心肌梗死早期致室性心律失常的機制研究.pdf

1、本文分三個部分進行探討：
　　第一部分：腫瘤壞死因子α（TNF-α）在急性心肌梗死整體大鼠致室性心律失常作用的研究
　　目的：結(jié)扎冠狀動脈左前降支（LAD），建立大鼠在體心臟急性心肌梗死模型，研究TNF-α在急性心肌梗死早期的表達規(guī)律與心電異質(zhì)性及室性心律失常的關(guān)系。
　　方法：電生理實驗記錄自發(fā)的急性心肌梗死后室性心律失常的發(fā)生情況及心肌缺血區(qū)、缺血邊緣區(qū)（BZ區(qū)）和非缺血區(qū)的單向動作電位（MAP），計算動作電位復(fù)極

2、離散度（MAPDd）。通過蛋白免疫印跡法及免疫熒光激光共聚焦技術(shù)，檢測急性心肌梗死大鼠BZ區(qū)心肌TNF-α的表達情況。直線相關(guān)分析統(tǒng)計學(xué)方法分析急性心肌梗死大鼠BZ區(qū)MAPDd和心肌TNF-α的蛋白表達之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：電生理實驗證實AMI組室性心律失常發(fā)生次數(shù)在急性心梗后各時間段均顯著高于Etanercept組（P＜0.05）；與心肌缺血區(qū)和非缺血區(qū)相比，BZ區(qū)MAPDd在急性心梗后各時間點均明顯增高（P＜0.05），同時

3、AMI組BZ區(qū)MAPDd在急性心梗后各時間點均明顯高于Etanercept組（P＜0.05）。室性心律失常的發(fā)生時間窗與BZ區(qū)心肌動作電位復(fù)極離散度的時間窗基本一致。通過蛋白免疫印跡法及免疫熒光激光共聚焦技術(shù)檢測到心肌TNF-α的表達從LAD結(jié)扎后10min開始增多，在20-30min時達到高峰，并維持至3小時，然后逐漸下降。Sham組處理前后無明顯變化。直線相關(guān)分析統(tǒng)計學(xué)方法顯示急性心肌梗死大鼠BZ區(qū)MAPDd和心肌TNF-α的蛋白表

4、達之間的相關(guān)系數(shù)為0.96（P＜0.01），為正相關(guān)。
　　結(jié)論：急性心肌梗死后TNF-α的表達明顯增加。TNF-α可能通過增加急性心肌梗死大鼠BZ區(qū)心肌動作電位的復(fù)極離散，對急性心肌梗死后室性心律失常的發(fā)生有誘導(dǎo)或促進的作用。而Etanercept能明顯減少急性心肌梗死大鼠BZ區(qū)心肌動作電位的復(fù)極離散，并減少心肌梗死后室性心律失常的發(fā)生。
　　第二部分：TNF-α對離體大鼠心臟急性心肌梗死早期室性心律失常作用的研究

5、　　目的：研究TNF-α在離體大鼠心臟急性心肌梗死早期的表達規(guī)律與心電異質(zhì)性及室性心律失常的關(guān)系，TNF-α對離體心肌組織塊心內(nèi)膜及心外膜單相動作電位的影響。
　　方法：在離體大鼠心臟灌流的條件下，進一步用蛋白免疫印跡法、免疫熒光激光共聚焦技術(shù)及電生理實驗驗證TNF-α在大鼠離體心臟急性心肌梗死早期的表達規(guī)律與心電異質(zhì)性及室性心律失常的關(guān)系。直線相關(guān)分析統(tǒng)計學(xué)方法分析離體心臟急性心肌梗死大鼠BZ區(qū)MAPDd和心肌TNF-α的蛋白表

6、達之間的關(guān)系。分離心肌組織塊，電生理實驗記錄在不同濃度TNF-α灌流條件下的MAP，計算離體心肌組織塊心內(nèi)膜和心外膜的單相動作電位差。
　　結(jié)果：通過蛋白免疫印跡法及免疫熒光激光共聚焦技術(shù)檢測到離體心臟心肌TNF-α的表達從LAD結(jié)扎后10min開始增多，在20min時達到高峰，然后逐漸下降。電生理實驗證實LAD結(jié)扎組室性心律失常發(fā)生次數(shù)在離體心臟急性心梗后各時間段均顯著高于LAD結(jié)扎+etanercept組（P＜0.05）；LA

7、D結(jié)扎組BZ區(qū)MAPDd在離體心臟急性心梗后各時間點均明顯高于LAD結(jié)扎+etanercept組（P＜0.05）；Sham組處理前后無明顯變化。離體心臟急性心梗后，室性心律失常的發(fā)生時間窗與BZ區(qū)心肌動作電位復(fù)極離散度的時間窗基本一致。隨著離體心臟急性心梗后TNF-α灌流濃度的增加，室性心律失常發(fā)生次數(shù)在急性心梗后各時間段也明顯增加、BZ區(qū)MAPDd在急性心梗后各時間點均明顯增大。直線相關(guān)分析統(tǒng)計學(xué)方法顯示離體心臟急性心肌梗死大鼠BZ區(qū)

8、MAPDd和心肌TNF-α的蛋白表達之間的相關(guān)系數(shù)為0.97（P＜0.01），為正相關(guān)。同一濃度的TNF-α對離體心肌組織塊的心內(nèi)膜及心外膜單相動作電位的影響不同，單相動作電位差值隨著灌流TNF-α濃度的增加而增大。
　　結(jié)論：在離體大鼠心臟灌流的條件下，離體心臟急性心肌梗死后TNF-α的表達明顯增加。TNF-α能夠直接引起離體心臟心肌梗死后室性心律失常的發(fā)生、BZ區(qū)MAPDd的變化。TNF-α對心內(nèi)膜及心外膜單相動作電位的不同影

9、響可能對急性心梗后室性心律失常折返環(huán)的形成有誘導(dǎo)或促進作用。
　　第三部分：TNF-α對單個心室肌細胞胞內(nèi)鈣及電生理特性的影響
　　目的：研究TNF-α對大鼠的單個心室肌細胞胞內(nèi)Ca2+濃度、動作電位時程（APD）、細胞膜短暫外向鉀電流(Ito)和內(nèi)向整流性鉀電流(IK1)的影響，探討其致室性心律失常的機制。
　　方法：用酶解法分離大鼠的心室肌細胞,免疫熒光激光共聚焦技術(shù)檢測不同濃度的TNF-α對單個心室肌細胞胞內(nèi)Ca

10、2+濃度的影響。應(yīng)用膜片鉗全細胞記錄技術(shù),觀察不同濃度的TNF-α對單個心室肌細胞APD、Ito和IK1的影響。
　　結(jié)果：通過激光共聚焦顯微鏡檢測到隨著TNF-α濃度的增加，引起了心肌細胞胞內(nèi)鈣濃度的升高，胞內(nèi)鈣超載甚至細胞死亡。應(yīng)用膜片鉗全細胞記錄技術(shù)，發(fā)現(xiàn)隨著TNF-α濃度的增加，引起了大鼠心室肌細胞動作電位2相平臺期時程的延長及形態(tài)的顯著異常。將TNF-α作用于大鼠心室肌細胞，可引起Ito和IK1電流密度隨著TNF-α濃度