Wnt-β-catenin通路在脈沖強磁場促神經干細胞增殖中的作用初探.pdf

1、第一部分β-catenin shRNA1、2兩種慢病毒載體抑制神經干細胞中β-catenin表達效果比較
　　目的:比較β-catenin shRNA1、β-catenin shRNA2兩種慢病毒載體抑制神經干細胞β-catenin表達效果。
　　方法:1、神經干細胞的獲得:取新生SD大鼠雙側側腦室下的神經干細胞,用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)14天。
　　2、構建β-catenin shRNA1、β-catenin shRNA2

2、兩種慢病毒載體及陰性病毒載體。
　　3、神經干細胞預轉染:將神經干細胞分為β-catenin shRNA1病毒轉染組、β-catenin shRNA2病毒轉染組和陰性病毒轉染組3組,計算各組轉染效率,初步確定轉染條件。
　　4、根據預轉染結果,分別用Real Time PCR和Western Blot方法檢測MOI=5時神經干細胞中β-catenin的表達水平。
　　結果:1、神經干細胞預轉染時,在低MOI時,β-ca

3、tenin shRNA1、β-catenin shRNA2及陰性對照病毒轉染率分別為83.89±10.8％、72.92±20.8%、78.48±18.1%,各組細胞間轉染率無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　2、在MOI=5時,β-catenin shRNA1組的β-catenin mRNA水平與空白組比較減少了63.56%,β-catenin shRNA2則減少了38.63%(p<0.05)。
　　3、兩組的蛋白表達減少,

4、其中β-catenin shRNA1的β-catenin蛋白減少最明顯(p<0.05)。
　　結論:在MOI=5時,β-catenin shRNA1慢病毒載體抑制神經干細胞中β-catenin表達效果最好。
　　第二部分β-catenin shRNA1慢病毒載體抑制神經干細胞中β-catenin表達的濃度效應
　　目的:比較β-catenin shRNA1慢病毒載體在不同MOI時抑制神經干細胞中β-catenin表達的

5、效果。
　　方法:1、神經干細胞的獲得:取新生SD大鼠雙側側腦室下的神經干細胞,用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)14天。
　　2、β-catenin shRNA1慢病毒在MOI=0、0.1、1、10時,用Real Time PCR和Western Blot方法檢測神經干細胞中β-catenin的表達水平。
　　結果:1、在MOI=0.1、1、10時,和MOI=0時比較,β-catenin mRNA的表達均有不同程度的減少,存在差異(

6、p<0.05),其中以MOI=10時,減少最明顯,與MOI=0時相比減少了71.21%。
　　2、當MOI=0.1、1、10時,神經干細胞β-catenin蛋白表達減少。其中當MOI=10時,β-catenin蛋白減少最明顯(p<0.05)。
　　結論:1、β-catenin shRNA1在MOI=10時,對神經干細胞中β-catenin的抑制效果最好。
　　2、確定MOI=10為最佳轉染濃度,用β-catenin s

7、hRNA1慢病毒轉染神經干細胞,能獲得抑制β-catenin表達的神經干細胞進行后續(xù)實驗。
　　第三部分wnt/β-catenin通路在脈沖強磁場促神經干細胞增殖中的作用初探
　　目的:利用抑制了β-catenin表達的神經干細胞,初步探討wnt/β-catenin通路在脈沖強磁場促神經干細胞增殖中的作用。
　　方法:1、神經干細胞的獲得:取新生SD大鼠雙側側腦室下的神經干細胞,用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)14天。
　　2

8、、用β-catenin shRNA1慢病毒,在MOI=10時轉染神經干細胞,即第二部分中獲得的抑制了β-catenin表達的神經干細胞作為實驗組。
　　3、將陰性組(陰性病毒轉染組)和實驗組(β-catenin shRNA1慢病毒轉染組)神經干細胞分別用4T、0.1Hz、8次的脈沖強磁場干預。
　　4、在用脈沖強磁場干預后的1天、7天,采用CCK8法檢測陰性組和實驗組的神經干細胞增殖情況。
　　結果:陰性病毒組在脈沖強