Wnt-β-catenin通路在脈沖強(qiáng)磁場促神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的作用初探.pdf

1、第一部分β-catenin shRNA1、2兩種慢病毒載體抑制神經(jīng)干細(xì)胞中β-catenin表達(dá)效果比較
　　目的:比較β-catenin shRNA1、β-catenin shRNA2兩種慢病毒載體抑制神經(jīng)干細(xì)胞β-catenin表達(dá)效果。
　　方法:1、神經(jīng)干細(xì)胞的獲得:取新生SD大鼠雙側(cè)側(cè)腦室下的神經(jīng)干細(xì)胞,用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)14天。
　　2、構(gòu)建β-catenin shRNA1、β-catenin shRNA2

2、兩種慢病毒載體及陰性病毒載體。
　　3、神經(jīng)干細(xì)胞預(yù)轉(zhuǎn)染:將神經(jīng)干細(xì)胞分為β-catenin shRNA1病毒轉(zhuǎn)染組、β-catenin shRNA2病毒轉(zhuǎn)染組和陰性病毒轉(zhuǎn)染組3組,計(jì)算各組轉(zhuǎn)染效率,初步確定轉(zhuǎn)染條件。
　　4、根據(jù)預(yù)轉(zhuǎn)染結(jié)果,分別用Real Time PCR和Western Blot方法檢測MOI=5時(shí)神經(jīng)干細(xì)胞中β-catenin的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1、神經(jīng)干細(xì)胞預(yù)轉(zhuǎn)染時(shí),在低MOI時(shí),β-ca

3、tenin shRNA1、β-catenin shRNA2及陰性對(duì)照病毒轉(zhuǎn)染率分別為83.89±10.8％、72.92±20.8%、78.48±18.1%,各組細(xì)胞間轉(zhuǎn)染率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。
　　2、在MOI=5時(shí),β-catenin shRNA1組的β-catenin mRNA水平與空白組比較減少了63.56%,β-catenin shRNA2則減少了38.63%(p<0.05)。
　　3、兩組的蛋白表達(dá)減少,

4、其中β-catenin shRNA1的β-catenin蛋白減少最明顯(p<0.05)。
　　結(jié)論:在MOI=5時(shí),β-catenin shRNA1慢病毒載體抑制神經(jīng)干細(xì)胞中β-catenin表達(dá)效果最好。
　　第二部分β-catenin shRNA1慢病毒載體抑制神經(jīng)干細(xì)胞中β-catenin表達(dá)的濃度效應(yīng)
　　目的:比較β-catenin shRNA1慢病毒載體在不同MOI時(shí)抑制神經(jīng)干細(xì)胞中β-catenin表達(dá)的

5、效果。
　　方法:1、神經(jīng)干細(xì)胞的獲得:取新生SD大鼠雙側(cè)側(cè)腦室下的神經(jīng)干細(xì)胞,用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)14天。
　　2、β-catenin shRNA1慢病毒在MOI=0、0.1、1、10時(shí),用Real Time PCR和Western Blot方法檢測神經(jīng)干細(xì)胞中β-catenin的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1、在MOI=0.1、1、10時(shí),和MOI=0時(shí)比較,β-catenin mRNA的表達(dá)均有不同程度的減少,存在差異(

6、p<0.05),其中以MOI=10時(shí),減少最明顯,與MOI=0時(shí)相比減少了71.21%。
　　2、當(dāng)MOI=0.1、1、10時(shí),神經(jīng)干細(xì)胞β-catenin蛋白表達(dá)減少。其中當(dāng)MOI=10時(shí),β-catenin蛋白減少最明顯(p<0.05)。
　　結(jié)論:1、β-catenin shRNA1在MOI=10時(shí),對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞中β-catenin的抑制效果最好。
　　2、確定MOI=10為最佳轉(zhuǎn)染濃度,用β-catenin s

7、hRNA1慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞,能獲得抑制β-catenin表達(dá)的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　第三部分wnt/β-catenin通路在脈沖強(qiáng)磁場促神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的作用初探
　　目的:利用抑制了β-catenin表達(dá)的神經(jīng)干細(xì)胞,初步探討wnt/β-catenin通路在脈沖強(qiáng)磁場促神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的作用。
　　方法:1、神經(jīng)干細(xì)胞的獲得:取新生SD大鼠雙側(cè)側(cè)腦室下的神經(jīng)干細(xì)胞,用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)14天。
　　2

8、、用β-catenin shRNA1慢病毒,在MOI=10時(shí)轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞,即第二部分中獲得的抑制了β-catenin表達(dá)的神經(jīng)干細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組。
　　3、將陰性組(陰性病毒轉(zhuǎn)染組)和實(shí)驗(yàn)組(β-catenin shRNA1慢病毒轉(zhuǎn)染組)神經(jīng)干細(xì)胞分別用4T、0.1Hz、8次的脈沖強(qiáng)磁場干預(yù)。
　　4、在用脈沖強(qiáng)磁場干預(yù)后的1天、7天,采用CCK8法檢測陰性組和實(shí)驗(yàn)組的神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況。
　　結(jié)果:陰性病毒組在脈沖強(qiáng)