脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)促神經(jīng)干細(xì)胞增殖的效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討在不同強(qiáng)度條件下不同強(qiáng)度磁刺激次數(shù)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞（neural syemcell,NSCc）增殖的影響，找出促神經(jīng)干細(xì)胞增殖作用最大的刺激強(qiáng)度和刺激次數(shù)即最佳刺激強(qiáng)度和最佳刺激次數(shù)，同時(shí)就脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)刺激促時(shí)節(jié)干細(xì)胞增殖現(xiàn)象的機(jī)制進(jìn)行了初步的探討。
　　 方法：取出生3天的SD乳鼠，分離和培養(yǎng)鼠源性NSCc。取第2代NSCc調(diào)整細(xì)胞密度1×106個(gè)/mL。分別在0T、2T、4T、6T、8T、10T、14T、16T強(qiáng)度的脈沖

2、強(qiáng)磁場(chǎng)下，以10次為恒定刺激次數(shù)對(duì)NSCc進(jìn)行干預(yù)，運(yùn)用CCK-8法于刺激后1天、3天、7天測(cè)定細(xì)胞增殖活性并繪制生長(zhǎng)曲線，得到最佳刺激強(qiáng)度。在最佳刺激強(qiáng)度下，分別以0次、2次、4次、6次、8次、10次為刺激次數(shù)對(duì)NSCc進(jìn)行干預(yù)，并于刺激后1天、3天、7天運(yùn)用CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖活性并繪制生長(zhǎng)曲線，得到最佳刺激次數(shù)。以0T 0次為對(duì)照組，以最佳刺激強(qiáng)度結(jié)合最佳刺激次數(shù)為實(shí)驗(yàn)組，將干預(yù)后的NSCc培養(yǎng)1周，運(yùn)用RT-PCR和透射電鏡

3、分別檢測(cè)nestin基因的表達(dá)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化，同時(shí)對(duì)Wnt/β-catenin通路中的β-catenin基因的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)的定量分析。
　　 結(jié)果：在恒定刺激次數(shù)為10次的條件下，不同實(shí)驗(yàn)強(qiáng)度的脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)對(duì)NSCc均有不同程度的促增殖作用，其中4T對(duì)NSCc的促增殖作用最為明顯，并于第7天時(shí)達(dá)到最大。恒定刺激強(qiáng)度為4T時(shí)，8次脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)刺激對(duì)NSCc促增殖作用最為明顯；恒定刺激強(qiáng)度為14T時(shí)，6次脈沖強(qiáng)磁場(chǎng)刺激對(duì)NSCc促

4、增殖作用最為明顯且兩者促增殖作用均于第7天時(shí)達(dá)到最大。而就4T/8次與14T/6次兩者而言，4T/8次干預(yù)下的神經(jīng)干細(xì)胞其增殖作用更加明顯。RT-PCR的結(jié)果顯示4T 8次的實(shí)驗(yàn)組中NSCc的nestin基因的表達(dá)量均較對(duì)照組顯著增加(P<0.001)，同時(shí)通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)組（4T/8次）和對(duì)照組（0T/0次并同樣條件培養(yǎng)7天）β-catenin基因進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，β-catenin的mRNA的量顯著提高。透射