多重PCR分子診斷和p53、HBB基因點突變檢測研究及艾滋病基因治病相關(guān)前期研究.pdf

1、第一部分，介紹由“公共引物”介導(dǎo)的多重PCR技術(shù)的應(yīng)用研究。
　　 目的：建立由“公共引物”介導(dǎo)的PCR反應(yīng)體系及條件以期進(jìn)一步用于多重PCR體系的建立。
　　 方法：以噬菌體基因組為參考序列設(shè)計“公共引物”序列，并以人類基因組為模板檢測“公共引物”結(jié)合“嵌合引物”的特異性及靈敏性。
　　 結(jié)果：“公共引物”具有高特異性、高敏感性的特點，“公共引物”結(jié)合“嵌合引物”PCR反應(yīng)體系可大幅降低“嵌合引物”濃度。

2、>　　 結(jié)論：由“公共引物”介導(dǎo)的PCR反應(yīng)體系可大幅降低引物間相互作用概率，為多重PCR體系的建立奠定基礎(chǔ)。
　　 第二部分，突變敏感性“分子開關(guān)”檢測p53、HBB基因熱點突變。
　　 目的：利用突變敏感性“分子開關(guān)”技術(shù)建立對p53、HBB基因熱點突變的檢測體系。
　　 方法：利用PCR及基因克隆技術(shù)得到p53、HBB基因野生及突變模板質(zhì)粒。設(shè)計硫化修飾引物，利用突變敏感性“分子開關(guān)”技術(shù)對突變位點進(jìn)行檢

3、測。
　　 結(jié)果：當(dāng)硫化修飾檢測引物與突變模板配對時，反應(yīng)得以進(jìn)行，有PCR產(chǎn)物;與野生模板不配對時，反應(yīng)非成熟性終止，無PCR產(chǎn)物。
　　 結(jié)論:突變敏感性“分子開關(guān)”技術(shù)能夠快速檢測p53、HBB基因突變位點，達(dá)到非此即彼的二元化效果。
　　 第三部分，TALENs蛋白酶在艾滋病基因治療應(yīng)用的前期研究。
　　 目的：構(gòu)建具有剪切CCR5基因的TALENs腺病毒包裝載體，并建立相應(yīng)的蛋白酶活性檢測系統(tǒng)。