人α-,1-（Ⅰ）型前膠原基因反義寡核苷酸抑制瘢痕增生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞系，為下一步試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。篩選COLIA1ASODN以陽離子脂質(zhì)體Oligofectamine為載體轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的最佳條件。了解陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)COLIA1ASODN轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞對(duì)COLIA1表達(dá)的影響。了解COLIA1ASODN瘢痕內(nèi)注射對(duì)人增生性瘢痕裸鼠移植模型的作用?！　〗Y(jié)論：所培養(yǎng)的是人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞，細(xì)胞系建立。以陽離子脂質(zhì)體Oligofectamine為載體

2、進(jìn)行COLIA1ASODN轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后ASODN主要分布在細(xì)胞核內(nèi)，不引起細(xì)胞凋亡；相對(duì)最佳轉(zhuǎn)染條件是接種細(xì)胞數(shù)量32.25×104個(gè)/孔、ASODN濃度150nmol/L、脂質(zhì)體3μl。在短時(shí)間內(nèi)(8小時(shí))，脂質(zhì)體表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞基因表達(dá)的影響，到了轉(zhuǎn)染后1天，其作用已消失；脂質(zhì)體本身對(duì)成纖維細(xì)胞的COLIA1mRNA和Ⅰ型膠原表達(dá)沒有抑制作用；在體外細(xì)胞水平，COLIA1ASODN有抑制COLIA1mRNA和蛋白表

3、達(dá)的作用，而陽離子脂質(zhì)體作為載體有增強(qiáng)效果。脂質(zhì)體促進(jìn)ASODN進(jìn)入細(xì)胞，并在核內(nèi)分布，阻斷了從DNA到mRNA的轉(zhuǎn)錄。蛋白表達(dá)逐漸上升，提示單次給藥不能夠滿意抑制Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)。蛋白表達(dá)抑制效果提示每天給藥一次可能可以達(dá)到較滿意的目的。COLIA1ASODN瘢痕內(nèi)注射有抑制Ⅰ型膠原合成的作用；ASODN和脂質(zhì)體聯(lián)合應(yīng)用，作用增強(qiáng)。每天給藥比隔天給藥的方法抑制Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)效果好。提示每天給藥的方法可以較滿意抑制Ⅰ型膠原蛋白合成。