Sp1圈套寡核苷酸抑制NIH3T3細胞增殖和Ⅰ型膠原基因表達.pdf

1、目的:研究針對轉錄因子Sp1的圈套寡脫氧核苷酸(decoy ODN)對小鼠胚胎成纖維細胞（NIH3T3）細胞增殖和Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達的影響，探討病理性疤痕的基因治療。 方法:體外設計合成針對轉錄因子Sp1的特異性啞鈴形decoyODN。用陽離子轉染試劑JetPEI將ODN轉染入NIH3T3細胞。分別用流式細胞儀檢測ODN轉染效率，激光共聚焦顯微鏡觀察ODN在細胞中的分布，電泳遷移率變動分析(EMSA)驗證ODN與Sp1

2、的特異性結合。用WST-8檢測ODN對細胞增殖的影響。用半定量PCR和熒光定量PCR檢測ODN對細胞Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達的抑制作用。 結果:轉染試劑JetPEI可將啞鈴形Sp1 decoy ODN高效轉染進入NIH3T3細胞，轉染效率達99.24％；激光共聚焦顯微鏡顯示進入細胞的ODN呈現明顯的時空分布，在轉染后12h，Sp1 decoy ODN幾乎全部進入細胞核內；EMSA 實驗證明Sp1 decoy ODN能與蛋白特