肺炎克雷伯菌超廣譜β內(nèi)酰胺酶與AmpC酶的耐藥表型及基因型分析.pdf

1、目的：肺炎克雷伯菌是臨床感染的常見致病菌之一，近年來由于產(chǎn)酶株的流行蔓延使其耐藥性大大增強、二次感染機率大，成為流行病學研究和防治工作中的難題。本課題對臨床收集的肺炎克雷伯菌從細菌學分析、抗菌藥物敏感性試驗以及超廣譜β內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase，ESBLs)與質(zhì)粒介導AmpC酶的分子生物學分類等方面進行研究，探討本地區(qū)肺炎克雷伯菌流行病學特性，為臨床肺炎克雷伯菌感染的鑒定和治療提供可靠依據(jù)。

2、 方法：1、臨床標本的細菌學分析：本試驗收集淄博地區(qū)2007年6月-2008年8月臨床送檢的血液、尿液、痰、胸腹水、分泌物等感染性標本。常規(guī)操作進行細菌培養(yǎng)，采用英國SENSITITRE ARIS熒光快速微生物鑒定/藥敏分析系統(tǒng)進行鑒定。2、抗菌藥物敏感試驗：根據(jù)美國臨床標準委員會(NCCLS)推薦的K-B法檢測肺炎克雷伯菌各菌株對常用抗菌藥物的敏感性。3、ESBLs和質(zhì)粒介導AmpC酶的表型檢測：根據(jù)藥敏結果初篩產(chǎn)ESBLs和Amp

3、C酶菌株，經(jīng)CLSI/NCCLS紙片確認試驗檢測ESBLs，三維確認試驗檢測質(zhì)粒介導AmpC酶。4、ESBLs和質(zhì)粒介導AmpC酶的基因型分析：運用聚合酶鏈反應(PCR)技術，以多組引物擴增產(chǎn)酶株的質(zhì)粒DNA，通過擴增產(chǎn)物的電泳圖譜分析ESBLs和質(zhì)粒介導AmpC酶的基因型。 結果：1、臨床標本的細菌學分析：本實驗共檢出淄博地區(qū)非重復的肺炎克雷伯菌68株。2、抗菌藥物敏感試驗：實驗結果顯示，肺炎克雷伯菌主要對亞胺培南、頭孢哌酮/

4、舒巴坦和頭孢吡肟敏感性較高，而對三代頭孢類抗生素高度耐藥。3、ESBLs和質(zhì)粒介導AmpC酶的表型檢測：從68株肺炎克雷伯菌中檢出產(chǎn)ESBLs陽性株20株、產(chǎn)質(zhì)粒介導AmpC酶陽性株3株、二者均陽性2株，分別所占比例為29.4％、4.4％和2.9％。4、ESBLs和質(zhì)粒介導AmpC酶的基因型分析：運用PCR技術可快速精確地分析兩種酶的基因型，結果ESBLs主要為TEM型和CTX-M型，AmpC酶以DHA型為主。 結論：1、臨床標

5、本的細菌學分析：應用常規(guī)細菌分離培養(yǎng)方法即可獲得肺炎克雷伯菌的純生長，應用熒光快速微生物鑒定/藥敏分析系統(tǒng)可實現(xiàn)細菌的快速準確鑒定。2、抗菌藥物敏感試驗：本實驗選用NCCLS推薦的K-B法對肺炎克雷伯菌進行藥物敏感性試驗，該實驗方法成熟、技術完善、并建立了各藥物敏感性判定標準，結果準確可靠，能更好地服務于臨床。3、ESBLs和質(zhì)粒介導AmpC酶的表型檢測：本實驗選用NCCLS推薦的紙片確認試驗和三維試驗分別檢測ESBLs和質(zhì)粒介導Amp