產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌耐藥性及基因分型研究.pdf

1、背景：
　　 腸桿菌科細(xì)菌對大多數(shù)廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的最常見的機(jī)制是產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)。超廣譜β-內(nèi)酰胺酶是能水解第三代頭孢菌素和單環(huán)酰胺類抗生素的β-內(nèi)酰胺酶。主要由大腸埃希菌和肺炎克雷伯桿菌產(chǎn)生。在不同國家、地區(qū)和不同醫(yī)院由于抗菌藥物的使用不同，產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌的耐藥基因型也不盡相同。本研究通過了解溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒童醫(yī)院產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌耐藥情況及耐藥基因型分布；明確各單獨

2、菌株間水平傳播情況，從而用于指導(dǎo)臨床醫(yī)生更合理的使用抗生素及預(yù)防超廣譜β-內(nèi)酰胺酶引起的院內(nèi)感染暴發(fā)流行。運用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(RAPD-PCR)基因分型技術(shù)監(jiān)測產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌的醫(yī)院感染情況，了解溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒童醫(yī)院各病區(qū)主要流行克隆株，為確定院內(nèi)交叉感染發(fā)生及院感控制提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 對2009年7月至2010年4月從溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒童醫(yī)院常規(guī)分離的臨床痰液、咽拭子、尿液、血液

3、、腦脊液等標(biāo)本，經(jīng)全自動微生物鑒定儀(DATEBEHRINGMicoscanWalk-Away96SI)初步鑒定出可疑的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌。然后根據(jù)美國臨床試驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLs2008年版)所推薦的雙紙片擴(kuò)散法對可疑菌株進(jìn)行產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌表型初篩及表型確證的檢測。對表型確證實驗陽性的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌，分別用特異性TEM型、SHV型、CTX-M-1組、CTX-M-9組、CTX

4、-M-2組、CTX-M-8組型等6對引物進(jìn)行細(xì)菌DNA擴(kuò)增(PCR)，對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳及隨機(jī)選取陽性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因序列測定。采用接合試驗了解超廣譜β-內(nèi)酰胺酶水平傳播情況。使用RAPD-PCR技術(shù)分析本院分離產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌菌株的同源性。對110株產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶臨床菌株使用抗生素藥敏紙片法檢測及分析其對頭孢噻肟、頭孢他啶、阿米卡星、亞胺培南等19種抗生素的耐藥情況。
　　 結(jié)果：

5、r>　　 1．產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌表現(xiàn)為多重耐藥性，其中哌拉西林耐藥率為85.3％：第一、二代頭孢菌素如頭孢唑啉、頭孢呋辛均在86％以上，第三代頭孢菌素如頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢他啶耐藥率均為77.2％；其他抗生素耐藥率如阿米卡星23.6％，左氧氟沙星30％，環(huán)丙沙星34.5％，復(fù)方新諾明55.8％，氨曲南75.2％，慶大霉素為60％;酶抑制復(fù)合制劑抗生素如呱拉西林/他唑巴坦31.8％，氨芐西林/舒巴坦80％等。本實驗分

6、離的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株目前尚未發(fā)現(xiàn)對亞胺培南耐藥，其耐藥率為0％。
　　 2．對通過表型確證實驗檢測為產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶陽性的110株肺炎克雷伯桿菌采用PCR方法進(jìn)行6種常見耐藥基因型檢測，其中發(fā)現(xiàn)有88株菌引物擴(kuò)增呈陽性。TEM型引物擴(kuò)增陽性46株，占41.8％;SHV型引物擴(kuò)增陽性5株，占4.5％。CTX-M-1組引物擴(kuò)增陽性47株，占42.7％;CTX-M-9組引物擴(kuò)增陽性36株，占32.7％。共有42株菌株(38

7、.2％)檢出兩種或兩種以上的耐藥基因型共同存在，多為CTX-M-1型與TEM型或CTX-M-9型共同存在。其中有1株CTX-M-1組型、CTX-M-9組型，1株SHV型、TEM型，4株TEM型、CTX-M-9組型，28株TEM型、CTX-M-1組型引物擴(kuò)增均為陽性；2株TEM型、SHV型及CTX-M-1組型，6株TEM型、CTX-M-1組型及CTX-M-9組型引物擴(kuò)增同時為陽性。
　　 3．采用接合試驗對產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎

8、克雷伯桿菌各基因型菌株進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示僅CTX-M-9基因陽性菌株接合成功，其他各基因型菌株均未得到接合子。
　　 4.2009年7月至2010年4月溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒童醫(yī)院分離的110株產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌，RAPD分為A、B、C、D、E、F、G、H八個基因型；RAPD主要基因分型病房分布情況：
　　 (1)A型分布于各科室，但以成人ICU、骨科、心胸外科和腔鏡外科等4個科室多見；
　　 (2

9、)E型在5個科室內(nèi)有分布，主要存在于兒童ICU，神經(jīng)內(nèi)科和消化內(nèi)科；
　　 (3)F型在3個科室內(nèi)有分布，主要分布于呼吸內(nèi)科、感染內(nèi)科和急診科；
　　 (4)B型分布比較單一，主要分布在心血管內(nèi)科病區(qū)。
　　 結(jié)論：
　　 1．產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌存在對多種抗生素多重耐藥，臨床工作中要重視其檢測及藥敏試驗。
　　 2．碳青霉烯類抗生素如亞胺培南仍是目前最有效的治療產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶

10、肺炎克雷伯桿菌感染的藥物。
　　 3．我院分離的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯桿菌的耐藥基因型以CTX-M-1組型為主，其次是TEM型、CTX-M-9組型及SHV型，未檢測出CTX-M-2組型及CTX-M-8組型耐藥基因。并且有兩種或兩種以上的耐藥基因型同時存在，以CTX-M-1型與TEM型或CTX-M-9型共同存在為多見。
　　 4．通過接合試驗，本院可能有CTX-M-9組型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶存在患者之間的水平傳播。<