產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌中整合子耐藥機制的研究.pdf

1、目的：研究產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類整合子的分布，探討整合子介導(dǎo)的耐藥機制在產(chǎn)ESBLs菌耐藥性中的作用。采用反向PCR對Ⅰ類整合子的側(cè)翼序列進行分析，為Ⅰ類整合子調(diào)控基因分析及克隆奠定研究基礎(chǔ)。
　　 方法：收集中南大學湘雅三醫(yī)院2009年6月至2009年12月產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌100株。根據(jù)各型整合酶和整合子已知基因序列設(shè)計引物，采用PCR對Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類整合酶基

2、因及blaTEM、blaSHV，和blaCTX-M基因進行檢測；PCR擴增整合子可變區(qū)，限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP)鑒定整合子可變區(qū)的同一性；PCR產(chǎn)物測序分析整合子所攜帶的基因盒種類。用HindIII限制性內(nèi)切酶對基因組DNA酶切后反向PCR擴增Ⅰ類整合酶基因的側(cè)翼序列。
　　 結(jié)果：產(chǎn)ESBLs菌株中Ⅰ類整合子陽性率為69％，整合子陽性的產(chǎn)ESBLs菌株對包括頭孢菌素類、喹諾酮類、磺胺類和β-內(nèi)酰胺/酶抑制劑類在內(nèi)的

3、12種抗菌藥物的耐藥率高于整合子陰性產(chǎn)ESBLs菌株，x2檢驗差異性有統(tǒng)計學意義，P<0.05；Ⅰ類整合子在blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因陽性菌株中檢出率分別為84.4％、72.9％和68.9％。無Ⅱ、Ⅲ類整合子檢出。反向PCR擴增出1800bp大小的Ⅰ類整合酶基因側(cè)翼序列片段。
　　 結(jié)論：在大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中，Ⅰ類整合子攜帶與產(chǎn)ESBLs菌株耐藥相關(guān)，Ⅰ類整合子對細菌多重耐藥的產(chǎn)生和傳播起著重要作用