水稻類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白基因OsCBL6的功能分析.pdf

1、高等植物中已知的Ca2+傳感器主要有三類：鈣調(diào)素蛋白CaM(calmodulin)及其相關(guān)蛋白；鈣依賴型蛋白激酶CDPK(Ca2+-dependent protein kinases);類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白(Calcineurin B-like)。類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白的結(jié)構(gòu)與動物的鈣調(diào)磷酸酶B調(diào)控亞基及神經(jīng)元鈣離子傳感器相似,含有四個用于結(jié)合Ca2+的EF-手型結(jié)構(gòu)域,并且能與一類絲/蘇氨酸蛋白激酶CIPK(CBL-interact

2、ing protein kinases)互作,通過CIPK蛋白激酶激活下游目標(biāo)基固。 本研究以擬南芥AtCBL1基因序列為探針,對水稻(Oryza sativa L.)全基因組進(jìn)行掃描,鑒定獲得一個水稻類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白基因OsCBL6,GenBank中的登錄號為DQ201200,定位于水稻第12染色體上。構(gòu)建了pBI-OsCBL6-GFP瞬時表達(dá)載體,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞,結(jié)果表明OsCBL6-GFP定位于洋蔥

3、表皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。將OsCBL6基因的ORF序列與表達(dá)載體pGEX-4T-2連接形成GST融合基因,使pGEX-4T-2-OsCBL6在大腸桿菌中較高效地表達(dá),OsCBL6基因的表達(dá)能顯著提高了大腸桿菌對高鹽和滲透脅迫的耐受性。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將OsCBL6基因轉(zhuǎn)化到煙草中,獲得10株轉(zhuǎn)基因陽性植株。將T0代轉(zhuǎn)基因煙草的葉盤用250 mM NaCl及15％PEG6000脅迫處理,轉(zhuǎn)基因植株與非轉(zhuǎn)基因植株之間的表型、葉綠素含量和電解