玉米大斑病菌St3HNR與St4HNR間功能互補關系研究.pdf

1、玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）能合成DHN黑色素，且黑色素與病菌的致病力密切相關，DHN黑色素的生物合成途徑包括5個關鍵酶基因，其中2個為還原酶基因（1,3，8-tri-HN reductase，3HNR和1,3，6，8-tetra-HN reductase，4HNR）。為進一步明確兩個HN還原酶在黑色素合成過程中的作用以及St3HNR與St4HNR蛋白間的關系，本研究利用原生質體轉化技術分別創(chuàng)制了St3HNR

2、基因和St4HNR基因回復和超表達突變體，通過對其進行分析，明確了St3HNR和St4HNR的功能和兩者之間的關系，研究結果如下:
　　1.以質粒pBARKS1-GFP為回復載體，草胺膦為抗性篩選標記分別構建了St3HNR基因和St4HNR基因的表達載體。利用聚乙二醇(PEG)介導法將構建好的表達載體分別轉化到玉米大斑病菌St3HNR基因缺失突變體和St4HNR基因缺失突變體的原生質體中，經(jīng)草胺膦篩選，PCR特異引物驗證，Sout

3、hernblotting及RT-PCR驗證得到了St3HNR基因回復突變體、St3HNR基因超表達突變體、St4HNR基因回復突變體和St4HNR基因超表達突變體，分別命名為△St3HNR/St3HNR、△St4HNR/St3HNR、△St4 HNR/St4 HNR、△St3HNR/St4HNR。
　　2.突變菌株的表型分析結果表明，△St3HNR/St3HNR、△St3HNR/St4HNR突變體和△St4HNR/St4HNR、△

4、St4HNR/St3HNR突變體的菌落、菌絲顏色有所恢復，均較相應的△St3HNR和△St4HNR基因缺失突變體顏色深，并且St4HNR基因的恢復效果優(yōu)于St3HNR基因，但仍比野生型菌落淺。
　　3.黑色素含量測定結果顯示，回復突變體和超表達突變體的胞內黑色素含量較基因缺失突變體顯著性增加;生長速率、侵染效率也有一定的恢復，但HT-毒素活性沒有明顯變化。
　　4.對突變體的分析結果表明，St3HNR與St4HNR間具有功能