生物發(fā)光分子成像技術在體監(jiān)測細胞周期的S期.pdf

1、背景與目的：
　　細胞周期指細胞從上一次有絲分裂結束到下一次有絲分裂完成所經(jīng)歷的整個過程，包含G1期、S期、G2期、M期四個階段。S期為DNA合成期，在這一階段完成DNA的合成以及合成與DNA組裝構成染色質等有關的組蛋白，此期不僅細胞DNA含量增加1倍，而且為進入有絲分裂提供物質，S期正常運行是細胞增殖的關鍵。腫瘤細胞與正常細胞的最大區(qū)別就是無限增殖，干擾DNA的合成阻斷S期，進而抑制腫瘤細胞的增殖現(xiàn)已成多種抗腫瘤藥物的主要作用機

2、制，可以選擇性地殺死腫瘤細胞，而不損害或少損害正常細胞。然而，在以S期為靶點的新藥研究過程中，研究者們最關心的一個問題就是如何在動物體內有效而簡捷的監(jiān)測S期。本研究旨在構建反映細胞周期S期融合報告基因，實現(xiàn)利用生物發(fā)光成像技術無創(chuàng)地在活體檢測細胞周期的變化。
　　材料和方法：
　　利用Skp2細胞周期依賴性變化和泛素化依賴性降解的特性，以融合蛋白技術構建Skp2-Luc2基因真核表達重組載體，通過共轉染方法建立穩(wěn)定表達Skp

3、2-Luc2及l(fā)uc2的腫瘤細胞株。采用細胞周期同步化法檢測Skp2-Luc2的表達是否依細胞周期而調節(jié)；采用siRNA干擾及蛋白酶體抑制實驗來驗證Skp2-Luc2的泛素化依賴性降解途徑；采用在體成像的方法來檢測Skp2-Luc2是否可以在體監(jiān)測細胞周期的變化；采用免疫組化的方法來驗證細胞是否被阻滯的細胞周期S期。應用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　?、賁kp2-luc2

4、的表達水平隨細胞周期變化而變化，在S期達到最高點。
　?、赟kp2-luc2在敲除cdh1及抑制蛋白酶體后積累明顯增加。而luc2未呈現(xiàn)明顯的變化。
　?、跾kp2-luc2熒光素酶活性在S期抗腫瘤藥治療后明顯上調，而luc2的活性未呈現(xiàn)明顯的變化。
　?、苤委熃M內源性skp2與cyclinA的表達明顯高于對照組，而p27的表達治療組明顯低于對照組。
　　結論：
　　成功的構建了細胞周期S期的報告基因Skp