乙肝病毒X基因轉(zhuǎn)化人肝細胞裸鼠成瘤實驗及其機制研究.pdf

1、目的： 1.試圖在裸鼠體內(nèi)證實HBV X基因能否轉(zhuǎn)化人肝細胞形成移植瘤。 2.移植瘤的組織形態(tài)學(xué)觀察。 3.初步研究裸鼠成瘤的可能機制。 方法： 1.利用已成功構(gòu)建的高表達HBX基因的pCMVX/QSG7701細胞株作為實驗組、以pRcCMV2/QSG7701細胞株和QSG7701細胞株為對照組接種于裸鼠皮下，觀察裸鼠能否成瘤。 2.觀察裸鼠的一般情況以及移植瘤的大小、質(zhì)地及周圍組織轉(zhuǎn)移情

2、況等。第5周處死裸鼠，摘下移植瘤。 3.HE染色、顯微鏡檢研究移植瘤的組織形態(tài)學(xué)特征。 4.RT-PCR方法研究移植瘤突變型P53基因和C-Myc基因在mRNA水平的表達情況。 5.免疫組化方法研究移植瘤的突變型P53蛋白、C-Myc蛋白的表達情況。 結(jié)果： 1.接種了pCMVX/QSG7701細胞株的裸鼠自接種日起至接種后三周活動度、進食無異常，體重逐漸增加，但自第四周起活動度減少、進食量下降、

3、體重無明顯增加。而接種了pRcCMV2/QSG7701細胞株和QSG7701細胞株的裸鼠精神、進食始終未出現(xiàn)異常，體重逐漸增加。 2.接種pCMVX/QSG7701細胞株的裸鼠在第二周開始出現(xiàn)移植瘤生長，成瘤率100％，周圍器官和組織未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶。對照組至接種后第35天無移植瘤生長。 3.HE染色證實移植瘤為肝細胞癌組織。 4.移植瘤、pCMVX/QSG77細胞、pRcCMV2/QSG7701細胞和QSG7701

4、細胞中均有突變型P53 mRNA及突變型P53蛋白的表達。移植瘤和pCMVX/QSG7701細胞中突變型P53 mRNA及突變型P53蛋白的表達量較pReCMV2/QSG7701細胞、QSG7701細胞明顯增高。 5.移植瘤、pCMVX/QSG7701細胞、pRcCMV2/QSG7701細胞和QSG7701細胞中均有C-Myc mRNA及C.Myc蛋白的表達。移植瘤和pCMVX/QSG7701細胞中C-Myc mRNA及C-My