牛膠原蛋白膜應用于兔皮膚缺損的實驗研究.pdf

1、目的:因腫瘤、外傷、感染等疾病造成口腔頜面部皮膚及粘膜缺損較為常見，對較大范圍的缺損臨床中最常使用的方式是自體組織移植，但自體組織來源有限，需開辟第二術區(qū)造成新的損傷并增加手術風險和并發(fā)癥的發(fā)生。因此，人工生物材料成為目前研究的熱點。它包括動物源性材料如豬小腸粘膜下層(Porcine small intestinal submucosa，P-SIS)、豬脫細胞真皮基質(Porcine acellular derual matrix，P-

2、ADM)、人體尸源性材料等。研究表明，生物材料不僅具有早期合成材料的優(yōu)點，也具有更好的生物相容性等特點，術后感染、疼痛、粘連等并發(fā)癥較合成材料低。
　　理想的皮膚修復材料不僅要求具有一定強度及物化性質穩(wěn)定，而且應具有組織相容性好，排斥反應低，能促進組織再生及快速血管化等特征。迄今為止還未開發(fā)出完全符合以上條件的理想修復材料，因此不斷的尋找合適的材料一直是臨床研究的熱點。
　　本研究通過從牛跟腱中制取的生物材料牛膠原蛋白膜及目

3、前國內常用的豬脫細胞真皮基質材料（商品名:海奧生物膜），應用于兔子皮膚全層缺損修復中，對術后一般情況、皮膚愈合率、病理組織切片、免疫組化、Masson染色等方面進行觀察，探討該生物材料修復缺損的效果，比較兩種生物材料在生物相容性、炎性反應、微血管形成速度及促進組織愈合能力的差異，為以后臨床應用提供實驗依據。
　　方法:
　　1.動物實驗:實驗用新西蘭兔16只，體重2.5-3.5kg，于新西蘭兔雙側背部均切除三處3cm×2cm

4、的皮膚全層，分為不覆蓋任何膜（空白組）、牛膠原蛋白膜覆蓋組（實驗組）、豬脫細胞真皮基質覆蓋組（對照組），于術后第7、14、21、28天處死動物后進行取材。
　　2.觀察指標:(1)大體觀察(2) HE染色觀察(3) Masson染色觀察(4)免疫組化觀察(5)愈合率的計算及統(tǒng)計學分析(6)對HE染色中肉芽組織及傷口成熟度進行評分。
　　結果:
　　一、大體觀察
　　1.16只實驗用新西蘭兔術區(qū)軟組織均未見明顯炎癥

5、反應，實驗組及對照組材料均成活未脫落。
　　2.實驗組材料于21天左右完全吸收、傷口愈合，對照組材料于23天左右完全吸收、傷口愈合，空白組于26天左右傷口愈合，兩種材料傷口愈合時間明顯快于空白組。
　　3.空白處瘢痕均較兩種材料修復后大，實驗組修復后的瘢痕小于對照組。
　　二、HE染色
　　1.空白組明顯炎癥反應，術后7天組織中炎性細胞最多，遠遠多于同一時期兩種材料修復后，7天后炎性細胞逐漸降低。兩種材料修復的組

6、織中炎性反應不明顯。
　　2.兩種修復材料早期均形成大量成纖維細胞及毛細血管，相互之間差別不大，但均明顯多于空白處。
　　3.28天觀察空白組傷口中心部分區(qū)域未上皮化，出現(xiàn)愈合延遲現(xiàn)象。兩種材料修復完全上皮化，表層角質層加厚。
　　三、Masson染色
　　28天時空白組修復后皮膚膠原纖維纖細，排列疏松，方向紊亂，考慮多為瘢痕。實驗組和對照組膠原纖維數量多，排列致密，形成三維纏繞結構，形成皮膚質量好。
　　

7、四、免疫組化
　　1.7天時空白組vWF未見明顯著色;實驗組呈黃褐色，陽性細胞染色強度高，血供恢復快;對照組陽性細胞染色程度較實驗組低，但明顯高于空白組。
　　2.28天時空白組Ki67表達后陽性細胞少;實驗組表皮陽性細胞多;對照組陽性細胞少于實驗組，高于空白組。
　　五、創(chuàng)面愈合率
　　通過Image Pro Plus軟件測量不同時期內創(chuàng)面面積的大小進行統(tǒng)計學分析，實驗組及對照組愈合率均高于空白組，相互差別不大

8、，各組總體相比(P＜0.05)具有統(tǒng)計學差異。
　　六、對HE染色中肉芽組織及傷口成熟度進行評分
　　肉芽組織量:實驗組＞對照組＞空白組
　　傷口成熟度:實驗組＞對照組＞空白組
　　各組相比(P＜0.05)具有統(tǒng)計學差異。
　　結論:
　　1.豬脫細胞真皮基質修復兔皮膚缺損具有良好的生物相容性、較快的表皮細胞及血供恢復速度。
　　2.牛膠原蛋白膜修復兔皮膚缺損具有良好的生物相容性及快速的血供恢復