牛膠原蛋白膜應(yīng)用于兔皮膚缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:因腫瘤、外傷、感染等疾病造成口腔頜面部皮膚及粘膜缺損較為常見(jiàn)，對(duì)較大范圍的缺損臨床中最常使用的方式是自體組織移植，但自體組織來(lái)源有限，需開(kāi)辟第二術(shù)區(qū)造成新的損傷并增加手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)和并發(fā)癥的發(fā)生。因此，人工生物材料成為目前研究的熱點(diǎn)。它包括動(dòng)物源性材料如豬小腸粘膜下層(Porcine small intestinal submucosa，P-SIS)、豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(Porcine acellular derual matrix，P-

2、ADM)、人體尸源性材料等。研究表明，生物材料不僅具有早期合成材料的優(yōu)點(diǎn)，也具有更好的生物相容性等特點(diǎn)，術(shù)后感染、疼痛、粘連等并發(fā)癥較合成材料低。
　　理想的皮膚修復(fù)材料不僅要求具有一定強(qiáng)度及物化性質(zhì)穩(wěn)定，而且應(yīng)具有組織相容性好，排斥反應(yīng)低，能促進(jìn)組織再生及快速血管化等特征。迄今為止還未開(kāi)發(fā)出完全符合以上條件的理想修復(fù)材料，因此不斷的尋找合適的材料一直是臨床研究的熱點(diǎn)。
　　本研究通過(guò)從牛跟腱中制取的生物材料牛膠原蛋白膜及目

3、前國(guó)內(nèi)常用的豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)材料（商品名:海奧生物膜），應(yīng)用于兔子皮膚全層缺損修復(fù)中，對(duì)術(shù)后一般情況、皮膚愈合率、病理組織切片、免疫組化、Masson染色等方面進(jìn)行觀察，探討該生物材料修復(fù)缺損的效果，比較兩種生物材料在生物相容性、炎性反應(yīng)、微血管形成速度及促進(jìn)組織愈合能力的差異，為以后臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)用新西蘭兔16只，體重2.5-3.5kg，于新西蘭兔雙側(cè)背部均切除三處3cm×2cm

4、的皮膚全層，分為不覆蓋任何膜（空白組）、牛膠原蛋白膜覆蓋組（實(shí)驗(yàn)組）、豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)覆蓋組（對(duì)照組），于術(shù)后第7、14、21、28天處死動(dòng)物后進(jìn)行取材。
　　2.觀察指標(biāo):(1)大體觀察(2) HE染色觀察(3) Masson染色觀察(4)免疫組化觀察(5)愈合率的計(jì)算及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(6)對(duì)HE染色中肉芽組織及傷口成熟度進(jìn)行評(píng)分。
　　結(jié)果:
　　一、大體觀察
　　1.16只實(shí)驗(yàn)用新西蘭兔術(shù)區(qū)軟組織均未見(jiàn)明顯炎癥

5、反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組材料均成活未脫落。
　　2.實(shí)驗(yàn)組材料于21天左右完全吸收、傷口愈合，對(duì)照組材料于23天左右完全吸收、傷口愈合，空白組于26天左右傷口愈合，兩種材料傷口愈合時(shí)間明顯快于空白組。
　　3.空白處瘢痕均較兩種材料修復(fù)后大，實(shí)驗(yàn)組修復(fù)后的瘢痕小于對(duì)照組。
　　二、HE染色
　　1.空白組明顯炎癥反應(yīng)，術(shù)后7天組織中炎性細(xì)胞最多，遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于同一時(shí)期兩種材料修復(fù)后，7天后炎性細(xì)胞逐漸降低。兩種材料修復(fù)的組

6、織中炎性反應(yīng)不明顯。
　　2.兩種修復(fù)材料早期均形成大量成纖維細(xì)胞及毛細(xì)血管，相互之間差別不大，但均明顯多于空白處。
　　3.28天觀察空白組傷口中心部分區(qū)域未上皮化，出現(xiàn)愈合延遲現(xiàn)象。兩種材料修復(fù)完全上皮化，表層角質(zhì)層加厚。
　　三、Masson染色
　　28天時(shí)空白組修復(fù)后皮膚膠原纖維纖細(xì)，排列疏松，方向紊亂，考慮多為瘢痕。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組膠原纖維數(shù)量多，排列致密，形成三維纏繞結(jié)構(gòu)，形成皮膚質(zhì)量好。
　　

7、四、免疫組化
　　1.7天時(shí)空白組vWF未見(jiàn)明顯著色;實(shí)驗(yàn)組呈黃褐色，陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度高，血供恢復(fù)快;對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞染色程度較實(shí)驗(yàn)組低，但明顯高于空白組。
　　2.28天時(shí)空白組Ki67表達(dá)后陽(yáng)性細(xì)胞少;實(shí)驗(yàn)組表皮陽(yáng)性細(xì)胞多;對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞少于實(shí)驗(yàn)組，高于空白組。
　　五、創(chuàng)面愈合率
　　通過(guò)Image Pro Plus軟件測(cè)量不同時(shí)期內(nèi)創(chuàng)面面積的大小進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組愈合率均高于空白組，相互差別不大

8、，各組總體相比(P＜0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　六、對(duì)HE染色中肉芽組織及傷口成熟度進(jìn)行評(píng)分
　　肉芽組織量:實(shí)驗(yàn)組＞對(duì)照組＞空白組
　　傷口成熟度:實(shí)驗(yàn)組＞對(duì)照組＞空白組
　　各組相比(P＜0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1.豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)修復(fù)兔皮膚缺損具有良好的生物相容性、較快的表皮細(xì)胞及血供恢復(fù)速度。
　　2.牛膠原蛋白膜修復(fù)兔皮膚缺損具有良好的生物相容性及快速的血供恢復(fù)