山羊C-KIT和SCF基因在皮膚中的表達(dá)及與毛色關(guān)系研究.pdf

1、本研究旨在探索c-KIT基因及SCF基因在不同毛色山羊皮膚中的表達(dá)及與成熟黑素細(xì)胞數(shù)量關(guān)系，并篩選出與山羊毛色相關(guān)的c-KIT基因及其配體SCF基因的SNPs標(biāo)記，以期對(duì)毛色性狀的分子育種實(shí)踐提供理論基礎(chǔ)。
　　研究中對(duì)SCF基因mRNA存在的不同剪接類型進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)存在可溶型(KC794711.1)，跨膜型(KC794712.1)和類跨膜型(KC794713.1)三種剪接形式。選擇TYR基因作為成熟黑素細(xì)胞的標(biāo)志分子，利用實(shí)時(shí)

2、熒光定量PCR技術(shù)對(duì)黑色和白色山羊皮膚組織中c-KIT、SCF以及TYR等毛色相關(guān)基因表達(dá)量進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn):黑色被毛山羊皮膚組織中TYR基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的8.280倍;c-KIT基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的1.255倍;可溶性SCF基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的0.267倍;跨膜型SCF基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的0.874倍;類跨膜型SCF基因mRNA表達(dá)量是白色被毛山羊的0.103倍?？扇苄許CF

3、和類跨膜型SCF基因mRNA表達(dá)量之和在黑白山羊個(gè)體間差異顯著(P＜0.05)，可能與黑白毛色的形成有關(guān)。
　　本研究利用免疫組織化學(xué)(IHC)方法對(duì)黑色和白色表型山羊皮膚組織中c-KIT的表達(dá)分布進(jìn)行研究，結(jié)果顯示:在山羊皮膚組織中，c-KIT陽(yáng)性區(qū)域主要分布于表皮、毛囊漏斗部以及毛囊內(nèi)外根鞘;黑色被毛山羊皮膚組織中c-KIT蛋白表達(dá)分布與白色被毛山羊組織無(wú)明顯差異，可能不是本研究中黑白毛色的形成的關(guān)鍵因素。
　　本研究利

4、用Ensembl數(shù)據(jù)庫(kù)中牛的全基因組序列作為模板設(shè)計(jì)引物，以四個(gè)品種共41只山羊基因組作為模板，通過(guò)PCR-測(cè)序技術(shù)獲得了山羊c-KIT基因外顯子1，2，5，6，7，8，14，15，16，17，18，19，20，21序列和SCF基因外顯子1,3，4，6，9及每個(gè)外顯子兩側(cè)的部分內(nèi)含子序列。通過(guò)比對(duì)分析這些序列，在c-KIT基因上共發(fā)現(xiàn)32個(gè)SNP位點(diǎn)，其中g(shù).68332351G＞A，g.68346732T＞G，g.68355062C＞T

5、,g.68359335G＞A4個(gè)位點(diǎn)為cSNPs。其中3個(gè)為錯(cuò)義突變，1個(gè)為同義突變。在本研究中，g.68346732G只存在于被毛為淺色的個(gè)體中，g.68359156T只存在于被毛呈深色的個(gè)體中，g.68332351A只存在于南江黃羊快長(zhǎng)系山羊個(gè)體中。在SCF基因上共發(fā)現(xiàn)19個(gè)SNPs和g.17658037insertA，g.17621420insertT,g.17621283insertGA3個(gè)InDels，其中1個(gè)位點(diǎn)為cSNPs

6、，并且該突變位于外顯子6，可能影響該基因產(chǎn)物可溶型SCF的正常成熟。
　　對(duì)c-KIT基因上的4個(gè)cSNPs進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)單倍型GTAT和ATAC只存在于深被毛顏色的個(gè)體，而單倍型GGAC只存在于淺色個(gè)體中。對(duì)c-KIT基因上的全部SNPs進(jìn)行分析，獲得了20個(gè)c-KIT基因單倍型，分化系數(shù)為0.892，其中15個(gè)只存在于單一的種群內(nèi);其中遼寧絨山羊c-KIT基因Tajima檢驗(yàn)結(jié)果為顯著，D值為2.414，該種群中可能存在對(duì)c-