不同毛色山羊皮膚組織MLPH基因差異表達(dá)及內(nèi)含子變異.pdf

1、本試驗根據(jù)Genbank上發(fā)布的山羊MLPH基因的CDS序列(EU332403)設(shè)計引物進(jìn)行擴增，擴增長度為104bp。查閱文獻(xiàn)選擇持家基因GAPDH作為內(nèi)參基因進(jìn)行擴增，擴增長度為107bp。用實時熒光定量的方法，通過Bio-Rad iQ5軟件得到的初始濃度，運用相對定量的2-ΔΔCt分析方法計算得到了MLPH基因在山羊不同被毛顏色皮膚組織中mRNA的差異表達(dá)量為:白色(1.000)＞黑色(0.204)＞棕色(0.094)。結(jié)果看出，

2、白色中MLPH基因的表達(dá)量最多，黑色次之，棕色最少。所得數(shù)據(jù)運用SPSS17.0軟件的單因素方差分析進(jìn)行差異顯著性分析，結(jié)果顯示白色與其他兩種被毛顏色之間差異顯著(P＜0.05)。推測山羊被毛顏色表現(xiàn)為白色是“上位白“座位Ⅰ和MLPH基因協(xié)同作用的結(jié)果;MLPH基因無論與MSHR基因作用，還是與Agouti基因作用均為拮抗作用。
　　 根據(jù)本課題組所測得的在Genbank上發(fā)布的山羊MLPH基因部分序列(EU316218)，分別

3、在內(nèi)含子7部分序列、內(nèi)含子14和外顯子15部分序列設(shè)計兩對引物進(jìn)行擴增，擴增長度分別為516bp和791bp。在這兩條擴增片段上，均發(fā)現(xiàn)了多個突變位點。因此用直接測序法對本實驗室保存的四個山羊品種120個個體進(jìn)行擴增測序，運用PopGene32、DNAsp、SPSS17.0和MAGE5.05軟件進(jìn)行群體遺傳學(xué)分析。更進(jìn)一步分析測得的突變位點與MLPH基因的關(guān)系。
　　 在山羊MLPH基因內(nèi)含子7部分片段上發(fā)現(xiàn)了6個突變位點，分別

4、為g.G8067C,g.T8068C, g.C8104G, g.G8151A, g.A8352G, g.A8362G。其中g(shù).G8067C和g.T8068C,g.A8352G和g.A8362G分別表現(xiàn)出完全連鎖現(xiàn)象。位點g.G8067C和g.T8068C分析得到兩個單倍型GT(65.8％)和CC(34.2％)，位點g.A8352G和g.A8362G分析得到兩個單倍型AA(76.2％)和GG(23.7％)。位點g.G8067C、g.T80

5、68C、g.G8151A、g.A8352G、g.A8362G均與山羊毛色稀釋基因MLPH基因有關(guān)。6個突變位點的綜合分析得到濟寧青山羊與遼寧絨山羊親緣關(guān)系較近，而與雷州黑山羊親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，聚類結(jié)果與地理位置均符合分析結(jié)果。
　　 在山羊MLPH基因內(nèi)含子14和外顯子15部分片段上共發(fā)現(xiàn)7個突變位點，內(nèi)含子14上6個，分別為g.G16669T,g.T16710A，g.C16711A，g.A16761G，g.C17041T,g.G1